猪瘟、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌病三联活疫苗

猪瘟、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌病三联活疫苗
　　Zhuwen，Zhudandu，Zhuduoshaxingbashiganjunbing Sanlian Huoyimiao

　　Combined Classical Swine Fever，Swine Erysipelas and Pasteurella Multocida Vaccine，Live

　　 本品系用猪瘟兔化弱毒株接种乳兔或易感细胞，收获含毒乳兔组织或病毒培养物，以适当比例和猪丹毒杆菌（G4T10株或GC42株）弱毒菌液、猪源多杀性巴氏杆菌（EO630株）弱毒菌液混合，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防猪瘟、猪丹毒和猪多杀性巴氏杆菌病（即猪肺疫）。

　　 【性状】 海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。

　　 【纯粹检验】 按附录 页进行检验，细胞毒配制的疫苗应纯粹。用组织毒配制的疫苗，如果有杂菌生长，应进行杂菌计数和病原性鉴定（附录 页），每头份非病原菌应不超过75个。

　　 【活菌计数】 对猪丹毒杆菌和猪多杀性巴氏杆菌进行活菌计数（附录 页）。按瓶签注明头份将疫苗稀释，接种含0.1％裂解血细胞全血及10％健康动物血清马丁琼脂平板中。每头份疫苗中，猪丹毒杆菌G4T10株应不少于5.0×108.0 CFU活菌，GC42株应不少于7.0×108.0 CFU活菌，多杀性巴氏杆菌EO630株应不少于3.0×108.0 CFU活菌。

　　 【安全检验】 按瓶签注明头份，将疫苗用灭菌生理盐水稀释，接种小鼠、兔、豚鼠和无猪瘟母源抗体的猪，应符合以下各项要求：

　　 （1）用体重18～22 g（30～35日龄）小鼠5只，各皮下注射疫苗0.5 ml（含1 头份）；

　　 （2）用体重1.5～2.0 kg兔2只，各肌肉注射疫苗1.0 ml（含2 头份）；

　　 （3）用体重300～400 g豚鼠2只，各肌肉注射疫苗1.0 ml（含2 头份）。（本项检验只适用于乳兔组织毒配制的疫苗。）

　　 观察10日，除用G4T10株配制的疫苗允许有1只小鼠死亡外，其他动物应全部健活。

　　 （4）选用无猪瘟病毒中和抗体（检测方法见附注）的断奶猪，接种前观察5～7日，每日上、下午各测体温一次。挑选体温、精神、食欲正常的使用。每批疫苗按瓶签注明头份用灭菌生理盐水稀释成6 头份/ml，肌肉注射猪4头，每头5.0 ml（含30 头份）。接种后，每日上、下午各观察并测体温1次，观察21日。体温、精神、食欲与接种前相比没有明显变化；或体温升高超过0.5℃，但不超过1℃，稽留不超过4个温次；或减食不超过1日。如果有1头猪体温升高1℃以上，但不超过1.5℃，稽留不超过2个温次，疫苗也可判为合格。如果有1头猪的反应超过上述标准；或出现可疑的其他体温反应和其他异常现象时，可用4头猪重检1次。重检的猪仍出现同样反应，疫苗应判为不合格。也可在猪高温期采血复归猪2头，每头肌肉注射可疑猪原血5.0 ml，测温观察16日。如果均无反应，疫苗可判合格。如果第1次检验结果已经确证疫苗不安全，则不应进行重检。

　　 【效力检验】 （1）猪瘟部分 下列方法任择其一。

　　 用兔检验 兔源疫苗按瓶签注明头份，将疫苗用灭菌生理盐水稀释成1/150头份/ml（兔源）或1/750头份/ml（细胞源），耳静脉注射体重1.5～3.0 kg兔2只，每只1.0 ml。 接种后，上、下午各测体温1次，48小时后，每隔6小时测体温1次，根据体温反应和攻毒结果进行综合判定。

　　 接种疫苗后，兔的体温反应标准如下：

　　 定型热反应（++） 潜伏期48～96小时，体温上升呈明显曲线，至少有3个温次升高1℃以上，并稽留18～36小时。如稽留42小时以上，则必须攻毒（接种新鲜脾淋毒或冻干毒），攻毒后如果无反应，可判为定型热。

　　 轻热反应（+） 潜伏期48～96小时，体温上升呈明显曲线，至少有2个温次升高0.5℃以上，并稽留12～36小时。

　　 可疑反应（±） 潜伏期48～96小时，体温曲线起伏不定，稽留不到12小时；或潜伏期在24小时以上，不足48小时及超过96小时至120小时出现热反应。

　　 体温反应呈二次高峰，有一次高峰符合定型热反应（++）或轻热反应（+）标准者，均须攻毒。攻毒后无反应时，该兔的热反应可判为定型热或轻热反应。

　　 无反应（－） 体温正常。

　　 结果判定 接种疫苗后，当2只兔均呈定型热反应（++），或1只兔呈定型热反应（++）、另1只兔呈轻热反应（+）时，疫苗判为合格。

　　接种疫苗后，当1只兔呈定型热反应（++）或轻热反应（+），另1只兔呈可疑反应（±）；或2只兔均呈轻热反应（+）时，可在接种后7～10日攻毒。

　　攻毒时，加对照兔2只，攻毒剂量为50～100倍乳剂。每只兔耳静脉注射1.0 ml。

　　 攻毒后的体温反应标准如果下：

　　 热反应（+） 潜伏期24～72小时，体温上升呈明显曲线，升高1℃以上，稽留12～36小时。

　　 可疑反应（±） 潜伏期不到24小时或72小时以上，体温曲线起伏不定，稽留不到12小时或超过36小时而不下降。

　　 无反应（－） 体温正常。

　　 攻毒后，当2只对照兔均呈定型热反应（++），或1只兔呈定型热反应（++），另1只兔呈轻热反应（+），而2只接种疫苗兔均无反应（－），疫苗判合格。

　　 接种疫苗后，如果有1只兔呈定型热（++）或轻热反应（+），另1只兔呈可疑反应（±）或无热反应（－），可对可疑反应兔或无反应兔采用扑杀剖检或采心血分离病毒的方法，判明是否隐性感染；或接种疫苗后，2只兔均呈轻热反应，亦可对其中1只兔分离病毒。方法是：接种疫苗后96～120小时之间，将兔扑杀，采取脾脏，用生理盐水制成50倍稀释的乳剂（脾脏乳剂应无菌），或采取心血（全血），耳静脉注射2只兔，每只1.0 ml。凡有1只兔潜伏期24～72小时出现定型热反应（++），疫苗可判为合格。

　　 接种疫苗后，由于出现其他反应情况而无法判定时，可重检。用兔做效力检验，应不超过3次。

　　 用猪检验 将疫苗用生理盐水稀释成每1/150头份/ml（兔源）或1/300 头份/ml（细胞源），肌肉注射无猪瘟中和抗体的猪4头（兔源）或2头（细胞源），每头1.0 ml，接种后10～14日，连同对照猪3头，各注射猪瘟病毒石门系血毒1.0 ml（不低于105.0 MLD），观察16日。对照猪应全部发病，且至少死亡2头，免疫猪应全部健活或稍有体温反应，但无猪瘟临床症状。

　　 （2）猪丹毒部分 下列方法任择其一。

　　用小鼠检验 按瓶签注明头份，将疫苗用20％氢氧化铝胶生理盐水稀释成0.1头份/ml，皮下注射体重16～18 g小鼠10只，各0.2 ml（含1/50头份），另取6只同条件小鼠，不接种作为对照。接种14日后，免疫组小鼠和3只对照组小鼠各皮下注射1000 MLD的猪丹毒杆菌1型和2型（各l株）强毒菌的混合菌液，另3只对照小鼠各皮下注射1 MLD的上述混合菌液，观察10日。注射1000 MLD的对照小鼠应全部死亡，注射1 MLD的对照小鼠应至少死亡2只，免疫小鼠应至少保护8只。

　　 用猪检验 按瓶签注明头份，将疫苗用20％氢氧化铝胶生理盐水稀释成每1.0 ml含1/50头份。用断奶1个月后、体重20 kg以上的猪10头，5头各皮下注射疫苗1.0 ml，另5头不注射疫苗留作对照。接种14日后，免疫猪和对照猪各静脉注射1 MLD的猪丹毒杆菌1型和2型（各1株）强毒混合菌液。观察14日，当对照猪全部死亡时，免疫猪应至少保护4头；当对照猪至少发病4头，且至少死亡2头时，免疫猪应全部健活。

　　 （3）猪肺疫部分按瓶签注明头份，将疫苗用20％氢氧化铝胶生理盐水稀释后进行检验，下列方法任择其一。

　　 用小鼠检验 用体重16～18 g小鼠10只，各皮下注射疫苗0.2 ml（含1/30 头份）。接种14日后，连同对照小鼠3只，各皮下注射多杀性巴氏杆菌C44-8株（CVCC 44408）强毒菌液2 MLD，另用对照小鼠3只，各皮下注射1 MLD，观察10日。攻击2 MLD的对照小鼠应全部死亡，攻击1 MLD的对照小鼠应至少死亡2只，免疫小鼠应至少保护8只。

　　 用兔检验 用体重1.5～2.0 kg兔6只，4只各皮下注射疫苗1.0 ml（含1/3 头份），另2只作对照。接种14日后，每只兔各皮下注射多杀性巴氏杆菌C44-8株（CVCC 44408）强毒菌液80～100CFU活菌，观察10日。对照兔应全部死亡，免疫兔应至少保护2只。

　　 用猪检验 用断奶1个月后、体重约20 kg猪8头，5头各皮下注射疫苗1.0 ml（含1 头份），另3头作对照。接种14日后，每头猪各皮下注射的多杀性巴氏杆菌C44-1株（CVCC 44401）强毒菌液1 MLD，观察10日。对照猪全部死亡时，免疫猪应至少保护4头；对照猪死亡2头时，免疫猪应全部保护。

　　 【剩余水分测定】 按附录 页进行测定，应符合规定。

　　【真空度测定】 按附录 页进行测定，应符合规定。

　　 【作用与用途】 用于预防猪瘟、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌病（即猪肺疫）。猪瘟免疫期为12个月，猪丹毒和猪肺疫免疫期为6个月。

　　 【用法与用量】 肌肉注射。按瓶签注明头份，用生理盐水稀释成1头份/ml。断奶半个月以上猪，每头1.0ml；断奶半个月以内的仔猪，每头1.0 ml，但应在断奶后2个月左右再接种1次。

　　 【注意事项】 （1）疫苗应冷藏保存与运输。

　　 （2）初生仔猪，体弱、有病猪均不应接种。

　　（3）接种前7日、后10日内均不应喂含任何抗生素的饲料。

　　 （4）稀释后，限4小时内用完。

　　（5）接种时，应作局部消毒处理。

　　（6）接种后可能出现过敏反应，应注意观察，必要时注射肾上腺素等脱敏措施抢救。

　　（7）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

　　 【规格】 （1）10头份/瓶 （2）20头份/瓶 （3）50头份/瓶 （4）100头份/瓶

　　【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为6个月；－15℃以下保存，有效期为12个月。

　　

　　修订说明：

　　1. 【性状】项：删除对颜色的描述。

　　2. 【安全检验】项：将“按《猪瘟活疫苗》中的方法进行测体温、观察和判定。”改为具体方法；删除“否则，可应用加倍数量小鼠重检一次，重检后，应符合规定。” ——重检的相关内容在“兽用生物制品检验的一般规定”中已有明确的统一规定。

　　3. 【效力检验】：将“同《猪瘟活疫苗》（兔源）”、“同《猪丹毒活疫苗》”、“同《猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗（EO630株）》”改为具体试验方法。其中，为完善标准，在“同《猪瘟活疫苗》（兔源）”的方法中增加了细胞源检验的部分，即，如果制品猪瘟部分是由细胞制备的，可按照猪瘟活疫苗（细胞源）的方法进行检验。

　　4. 增加【作用与用途】、【用法与用量】和【注意事项】项。