摘 要：
目的：建立用无毒的乙醇作为反相高效液相色谱流动相溶剂分析中药及中成药有效成分的方法。
方法：用乙醇－水系统作反相高效液相色谱流动相测定中药及中成药的主要有效成分, 并与甲醇－水或乙腈－水系统的测定结果进行比较。
结果：2种色谱系统均达到基线分离，测得含量基本一致，乙醇系统与甲醇系统或乙腈系统相比，测定相对偏差＜±3％（n = 3）。
结论：选择合适的柱温等色谱条件，乙醇可用作反相高效液相色谱流动相分析中药及中成药中有效成分，安全、准确。
甲醇、乙腈为反相高效液相色谱法常用溶剂，均有毒。乙醇与甲醇的理化性质相似却无毒, 但25℃时其粘度是甲醇的2倍［1］, 限制了它在反相高效液相色谱法中的应用。本文以部分常见中药及其成药中有效成分为例，使流动相中乙醇比例在4.75％～66.5％进行研究。结果证明，在一般情况下，适当升高柱温可以用乙醇代替乙腈或甲醇作为反相高效液相色谱流动相溶剂，它在反相色谱中溶剂强度较大，可减少有机溶剂用量，而且乙醇无毒,有利于实验环境的保护。
1 仪器与试药
美国HP1100型高效液相色谱仪，HP1100化学工作站；日本岛津LC－6A液相色谱仪，CR－4A色谱处理机，SPD－6AV紫外检测器。
丹参素对照品（归一化法测定，含量大于98％），上海医科大学提供；射干苷（归一化法测定，含量大于98％），重庆市药检所提供；其余对照品（供含量测定用或归一化法测定含量大于98％）, 中国药品生物制品检定所提供。各种生药市售（ 经本院生药室鉴定，符合中国药典标准）。各种中药制剂为市售或厂家提供。
乙腈为色谱纯, 其它试剂均为分析纯, 水为超纯水。
2 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取各种对照品适量，分别用适当的溶剂溶解，制成每1 mL 含黄芩苷0.025 mg、大黄素0.02 mg 、葛根素0.04 mg 、丹参素0.1 mg 、原儿茶醛0.02 mg 、丹参酮ⅡA 0.01 mg、柚皮苷0.06 mg、盐酸小檗碱0.05 mg、盐酸巴马汀0.05 mg、射干苷0.05 mg、蛇床素0.015 mg的溶液作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：采用适当的方法［2～7］分别提取适量生药及制剂，提取液过滤，取续滤液作为供试品溶液。
3 色谱条件
色谱柱：Shimpack CLC－ODS（150 mm ×6 mm, 5 μm），自填国产YWG C18（10 mm ×4.6 mm, 10 μm）作保护柱，除特别指出，流速均为 1 mL.min-1，进样10 μL ，流动相、检测波长、柱温与柱压如下：
3.1 丹参及丹参注射液(华西医科大学制药厂)中丹参素、原儿茶醛 Ⅰ：乙醇－0.2 mol.L-1 醋酸铵(硫酸调pH 2.2)(4.75∶95.25)，280 nm，35 ℃，7.6 MPa；Ⅱ［2］：甲醇－0.2 mol.L-1 醋酸铵(硫酸调pH 2.2)(12 ∶ 88)，280 nm，35 ℃，8.0 MPa；见图1(0.09 AUFS)。
3.2 葛根及松龄血脉康胶囊(成都康弘制药有限公司)中葛根素 Ⅰ： 乙醇－［36%醋酸－水(3 ∶ 72)］(11.4 ∶ 88.6)，247 nm，40 ℃，9.6 MPa；Ⅱ［3］：甲醇－［36%醋酸－水(3∶72)］(25∶75)，247 nm ，35 ℃，11.5 MPa；
3.3 射干及口腔舒(华西医科大学研制)中射干苷 Ⅰ：乙醇-0.05 mol.L－1 磷酸二氢钾(17.1∶82.9，pH 3.0)，265 nm，45 ℃，9.6 MPa；Ⅱ：甲醇－0.05 mol.L－1 磷酸二氢钾(32∶68， pH 3.0)，265 nm，40 ℃，9.6 MPa；
3.4 骨碎补及骨碎补胶囊(自制)中柚皮苷 Ⅰ：乙醇-36%醋酸－水(22.8∶4∶77.2 )，283 nm，35 ℃，10.3 MPa；Ⅱ［4］ ：甲醇－36％醋酸－水(35∶4∶65 )，283 nm，35 ℃，9.8 MPa；
3.5 黄芩及参柴颗粒(成都华宇制药厂)中黄芩苷 Ⅰ：乙醇－0.2 mol.L－1 磷酸二氢钠(磷酸调pH 2.7)(24.7∶75.3)，275 nm，0.9 mL.min-1，45 ℃，12.8 MPa； Ⅱ［5］： 甲醇－0.2 mol.L－1 磷酸二氢钠(磷酸调pH 2.7)(45∶55)，275 nm，0.9 mL.min-1，35 ℃，12.8 MPa；
3.6 黄连及痛宝胶囊(四川恩威制药有限公司)中盐酸小檗碱 Ⅰ：乙醇－水－磷酸二氢钾－十二烷基硫酸钠(408.5 mL∶591.5 mL∶3.4 g∶1.7 g)，345 nm，60 ℃, 10 MPa；Ⅱ〔6〕： 乙腈－水－磷酸二氢钾－十二烷基硫酸钠(500 mL∶500 mL∶3.4 g∶1.7 g )，345 nm，25 ℃, 7.3 MPa；
3.7 蛇床子及洁尔阴洗液(四川恩威制药有限公司)中蛇床素 Ⅰ：乙醇－水－磷酸(51.3∶48.7∶0.2)，322 nm，50 ℃，12.2 MPa； Ⅱ：甲醇－水－磷酸(75∶25∶0.2)，322 nm，35 ℃，9.8 MPa；
3.8 大黄生药、制首乌及异功化瘤颗粒(成都中医药大学研制)中大黄素 Ⅰ：乙醇－0.2 mol.L－1 磷酸二氢钠（57∶43，pH 3.0），289 nm，55 ℃，11.9 MPa； Ⅱ： 甲醇－0.2 mol.L－1 磷酸二氢钠（80∶20，pH 3.0），289 nm，40 ℃，8.2 MPa；
3.9 丹参及复方丹参片(四川什邡制药厂)中丹参酮ⅡA Ⅰ：乙醇－水(66.5∶33.5)，269 nm，50 ℃，11.6 MPa； Ⅱ［2］： 甲醇－水(85∶15)，269 nm，35 ℃，8.1 MPa；
4 结果与讨论
4.1 含量测定的准确性 为考察乙醇用作反相高效液相色谱流动相溶剂测定样品的准确性，本文用甲醇或乙腈作流动相溶剂（文献报道或本实验室未发表的色谱条件）测定同一样品，将乙醇系统测得含量与之比较（均为3次测定平均值），相对偏差均小于3％