高效液相色谱法测定胃肠舒颗粒中黄芪甲苷的含量

摘 要：目的：建立以高效液相色谱法测定胃肠舒颗粒中黄芪甲苷含量的方法。方法：以Irregular C18为色谱柱，以乙腈-水(30：70)为流动相。流速为1.2ml／min，检测波长为203nm。结果：黄芪甲苷检测浓度在0.015～0.24mg／ml范围内线性关系良好(r=0.9998)，平均加样回收率为99.83％(RSD=1.46％，n=5)。结论：本方法重现性好、专属性强，可用于胃肠舒颗粒的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；胃肠舒颗粒；黄芪甲苷；含量测定
胃肠舒颗粒由黄芪、白芍、白花蛇舌草、延胡索(醋制)、甘草等组成，具有益气养阴、活血止痛、清热解毒之功效，临床上用于治疗萎缩性胃炎等各种消化道慢性炎症。处方中黄芪为君药，而黄芪甲苷则为黄芪的主要活性成分之一。由于黄芪甲苷的含量测定可作为胃肠舒颗粒质量控制指标之一，为有效控制胃肠舒颗粒的质量，笔者在参考文献的基础上采用灵敏度高、专属性强的高效液相色谱法(HPLC)测定胃肠舒颗粒中黄芪甲苷的含量。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪，包括LC-10ATvp泵、SPD-10Avp检测器(日本岛津公司)；Class-10Avp工作站(日本岛津公司)；TG332A型微量分析天平(上海天平仪器厂，分度值：0.01mg)。
黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0781—200109)；胃肠舒颗粒(第四军医大学唐都医院药剂科自制，批号：20020724、20021127、20030313)；乙腈、甲醇为色谱纯；正丁醇、石油醚为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Irregular C18(250mm×4.6mm，10μm)；流动相：乙腈-水(30：70)；柱温：室温；流速：1.2ml／min；检测波长：203nm；进样量：20μ1。
2．2 对照品溶液的制备
准确称取黄芪甲苷对照品4.809mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，即得。
2．3 供试品溶液的制备
准确称取胃肠舒颗粒约15g，置于锥形瓶中，加入甲醇50ml，超声处理30min，滤过，弃去初滤液。准确量取续滤液25ml，水浴蒸干，残渣加水20ml溶解，并用石油醚萃取4次，每次10ml，弃去石油醚层，水层挥发至无醚味。继续用饱和正丁醇萃取5次，前2次为15ml，后3次为10ml，合并正丁醇提取液，用1％的氢氧化钠溶液洗涤3次，每次15ml，弃去氢氧化钠溶液。将正丁醇溶液蒸干，残渣加入4ml甲醇溶解， 并用0.45μm 微孔滤膜滤过，即得。
2．4 阴性对照品溶液的制备
按处方配制不含黄芪的样品颗粒，并按“2．3”项下方法对样品进行处理，即得。
2．5 色谱行为与系统适应性试验
分别精密吸取“2．2”、“2．3”和“2．4”项下溶液各20μ1，按“2．1”项下色谱条件进样，记录HPLC色谱。其中，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算不低于3100。
2．6 线性关系考察
精密吸取“2．2”项下溶液适量，分别配制成浓度为0.240、0.120、0.060、0.030、0.015mg／ml的溶液，并按“2．1”项下色谱条件分别进样20μ1，记录峰面积(A)。以A为纵坐标，浓度(C)为横坐标进行线性回归，得回归方程为A=1.319×0.000001C一3.468×0.001(r=0.9998)，表明黄芪甲苷浓度在0.015～0.240mg／ml范围内线性关系良好。
2．7 样品含量测定
取3批样品，按“2．3”项下方法制备成供试品溶液，各取20μ1，按“2．1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，并以外标法计算样品中黄芪甲苷的含量。
2．8 加样回收率试验
准确称取已知黄芪甲苷含量的3批胃肠舒颗粒各约15g，准确加入黄芪甲苷对照品溶液适量，并按“2．7”项下方法测定含量，计算回收率。
2．9 精密度试验
精密吸取“2．2”项下溶液，按“2．1．项下色谱条件重复进样5次，测得黄芪甲苷峰面积的相对标准差为0.87％，表明其精密度良好。
2．10 稳定性试验
精密吸取“2．2”项下溶液，按“2．1．．项下色谱条件在0、4、8、12、24h分别进样20>1并测定峰面积，结果黄氏甲苷峰面积的相对标准差为1.45％(n=5)，表明本品溶液在24h内稳定。
2．1l 重现性试验
取同一批胃肠舒颗粒5份，按“2．7”项下方法分别进行测定，结果相对标准差为2.3％，表明本法重现性较好。
3 讨论
笔者参考相关文献 ，在制备供试品溶液过程中曾采用氨试液洗涤正丁醇，结果样品色谱图中黄芪甲苷干扰峰较多。而改用1％氢氧化钠溶液洗涤后则效果满意，因胃肠舒颗粒中的化学成分较多，以正丁醇萃取后用1％的氢氧化钠溶液可除去甘草等中药中的酸性成分，减少干扰。
笔者参考相关文献，以甲醇-水(50：50)、甲醇-水(30：70)、乙腈(国产)-水(30：70)为流动相时黄芪甲苷峰均出现倒峰而且干扰峰较多，而改用进口乙腈后上述现象有很大的改善且干扰明显降低。因此，流动相的质量好坏对峰形和出峰时间都有一定影响。