2005《中国药典》青霉素V钾含量测定项下：
色谱条件与系统适用性试验：用葡聚糖凝胶G-10（40～120μm）为填充剂，玻璃柱内径1.3～1.6cm，柱高30～40cm；以pH7.0磷酸盐缓冲溶液（0.1mol/L磷酸氢二钠溶液-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液）（61：39）为流动相A，以水为流动相B；流速为每分钟1.5ml；检测波长为254nm。理论板数按蓝色葡聚糖2000峰不低于700。青霉素V钾片和青霉素V钾胶囊的含量测定方法同青霉素V钾。
文献报道的方法：
丁红雨等用HPLC法测定青霉素V钾片的含量。仪器：JASCO PU-980型高效液相色谱仪。色谱柱：Diamonsil TM Cl8柱(5μm，4.6mm×150mm)；流动相：水-乙腈-冰醋酸(325：175：3.5)；检测波长：254nm；流速：1.0mL/min。
王雁等用HPLC法测定青霉素V钾片的含量。仪器：美国SSISERIES IV 双泵高效液相色谱仪。固定相：ODS柱(4.6×250mm)；流动相：水-乙腈-冰醋酸(650：350：5.75)；流速：1.2ml/min；检测波长：254nm。
另外，郑建斌等用二次微分简易示波伏安法测定青霉素V钾的含量。
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