茵莲清肝合剂中芍药苷的含量测定

摘要：目的：研究茵莲清肝合剂中芍药苷的含量测定方法。方法：采用高效液相法。色谱柱YWGC18(250mm×4.6 mm，10μm)，室温，流动相为甲醇-水(30：70)；流速为1mL／min；检测波长为230nm。结果 芍药苷在0.15～1.5 μg范围内呈线性关系(r=0.9998，n=5)，平均加样回收率为99.16％ 。RSD为0.87％。结论方法准确、可行，可用于茵莲清肝合剂的质量控制。
关键词：茵莲清肝合剂；芍药苷；高效液相
茵莲清肝合剂由茵陈、半枝莲、白芍、柴胡、贯众、茯苓、广藿香、板蓝根等19味药组成，收载于部颁标准中药成方制剂第12册。由于该合剂药味组成多、相互干扰大，因此一直没有测定含量。为更好地控制该合剂的质量，本实验设计采用了检测灵敏度高、准确度及精密度好的HPLC法，测定处方中的主要药物白芍中芍药苷的含量。
1 仪器与试药
美国惠普HP1050型高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器，化学工作站；H66025型超声清洗器(无锡市超声电子设备厂)；甲醇为色谱纯，流动相所用水为双蒸水。茵莲清肝合剂由北京亚东生物制药有限公司提供；芍药苷对照品购买于中国药品生物制品鉴定所(批号0736—9708)。 ‘
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱为YWGCl8 4.6mm×250 mm，10μm，大连化物所，柱效以芍药苷计其理论塔板数不低于2600；流动相为甲醇-水(30：70)；流速为1mL／min；检测波长为230nm；柱温为室温。
2．2 线性关系考察
精密称取芍药苷对照品3mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5、1、2、2．5、5.0μL按上述色谱条件进样测定，以峰面积与对照品的量进行线性回归，求得回归方程为A=一193.47+1343.78 m，r=0.9998，芍药苷的线性范围为0.77～6.12μg，可用外标一点法进行含量测定。
2．3 样品提取溶剂及提取条件优化
据文献报道，芍药苷的常用提取溶剂为水、甲醇、乙酸及稀醇，文献指出芍药药材中芍药苷的提取效率以水为最高，所以，本实验采用水为样品提取溶剂，对加水倍数及超声波处理时间做了对比研究。优化了样品的提取条件，同时将水提与甲醇提做了对比。
提取条件优化：取样品100mL，减压干燥，取粉末，研细(过50目筛)，精密称取0.3g，共5份，精密加入50％ 乙醇40mL，称重，密塞，超声处理，取出。称重，补足重量，取上清液以0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液，按上述色谱条件测定。
结果：样品各组间无明显差异(P>0.05)，但以超声10min及20min的含量偏低。
结论：采用超声提取30min。
2．4 精密度试验
精密吸取0.306g/L芍药苷对照品溶液10μL，按前述色谱条件重复进样5次，测得峰面积RSD为0.64％，符合分析要求。
2．5 重现性试验
取样品100mL，减压干燥，取粉末研细，精密称取0.3g，共5份，同样品测定项下重复操作5次，并计算每份样品中芍药苷的含量。求得平均含量为0.69％，RSD为1.81％，符合分析要求。
2．6 回收率试验
精密吸取已知含量的样品100mL，减压干燥，取粉末0.3g，共5份，按下表分别加人芍药苷对照品一定量，按前述色谱条件测定，结果如下，求得平均回收率为99.16％ ，RSD为0.87％。
2．7 芍药苷含量限度确定
取8批样品，按前述样品测定项下操作，测定、并计算含量。根据上述8批样品的测定结果，拟订该制剂中芍药苷的含量应不低于0.6％。
3 讨论
(1)实验过程中采取了回流提取和超声波提取，经比较发现超声波提取法时间短、提取物中杂质少，直接测定可以达到完全分离。(2)芍药苷的含量测定方法有薄层层析-比色法、薄层层析-紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相法等，该实验采用了准确度及灵敏度、重现性好的高效液相法。该方法的建立丰富了茵莲清肝合剂的质量标准，为该药品的质量均一、可控，提供了保障。