薄层扫描法测定荷叶中荷叶碱的含量

摘要 目的：建立薄层扫描法分离测定荷叶中荷叶碱的含量。方法：采用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(30：40：20：10)为展开剂，检测波长272 nm。结果：荷叶碱在0.5～5μg 范围内呈现良好线性关系，平均回收率为97.4％，RSD=3.83％(n=5)。结论：该方法简便准确，稳定性高，可作为其质量控制依据。
关键词:薄层扫描法;荷叶碱;荷叶
荷叶为睡莲科植物莲Lelumbo nucifera Gaertn的干燥叶，具有清热解暑、升发清阳、凉血止血之功效，现代药理研究证明其具有调节血脂、镇咳祛痰、降低血压、平滑肌解痉等作用，临床用于治疗高脂血症、肥胖、肺炎、夏季热等症。荷叶中的生物、碱成分具有明显的降脂生理活性，但其含量测定方法尚未见报道，本文采用薄层扫描法，对其中的荷叶碱进行了定量分析，为更好地开发利用荷叶资源和完善提高荷叶质量标准提供参考。
1 仪器与试药
CAMAG TLC SCANNER 3薄层扫描仪(瑞士CAMAG公司)；定量点样毛细管(美国DrummondScientific Co．)；荷叶碱(中国药品生物制品检定所)；荷叶(市购三批，经本所鉴定)；硅胶GF254(青岛海洋化工有限公司)；试剂均为分析纯。
2 薄层色谱及扫描条件
薄层板：0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板。展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(30：40：20：10)10℃以下放置12 h的下层溶液。紫外光254nm下定位，经光谱测定，确定λs=272nm。单波长线性扫描。此色谱条件下，荷叶碱与其他成分分离良好，色谱扫描图见图。
3 方法与结果
3．1 对照品溶液的制备
精密称取荷叶碱对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀。
3．2 供试品溶液的制备
精密称取荷叶药材粉末约1g，置索氏提取器中，加入浓氨水约1ml使润湿，再加氯仿适量，回流提取至提取液无色，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿溶解定量转移并至10ml量瓶中定容至10ml。
3．3 线形关系考察
用定量毛细管精密吸取对照品溶液0.5，1，2，3，4，5μl，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶GF254薄层板上，按上述层析及扫描条件测定，以斑点峰面积值为纵坐标，点样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=2.37×1000X+5.90×1000，r=0.9991，表明荷叶碱在0.5～5μg间线形关系良好。
3．4 稳定性试验
精密吸取荷叶碱对照品溶液2μl，按上述条件点样，展开，扫描，每隔30min测定1次，结果表明，斑点在5h内稳定(RSD=1.1％)。
3．5 精密度试验
分别精密吸取荷叶碱对照品溶液2μl，在同一薄层板上点l0个点，展开，扫描，结果峰面积RSD=0.9％。
3．6 重复性试验
取粉碎后混合均匀的荷叶样品6份，按供试品溶液的制备方法制备供试液，依法测定，结果RSD=1.2％。
3．7 回收率试验
精密称取已知含量荷叶样品约0.5g，分别加入一定量的荷叶碱对照品，按上述方法提取并测定，计算回收率。
3．8 样品测定
精密称取荷叶样品约1g，按供试液制备方法制备，分别精密吸取供试液5 l，对照品溶液2μl，4μl，点于同一薄层板上，按上述条件测定，外标两点法计算含量。
4 讨论
4．1 薄层扫描法测定生物碱含量，通常采用生物碱专属显色剂稀碘化铋钾试液显色，但显色后斑点的稳定性稍差，本文以荧光板(硅胶GF254)替代硅胶G板，在保证分离效果的同时，也解决了显色稳定性的问题，可供其它生物碱检测借鉴。
4．2 提取方法的选择：曾试用甲醇或乙醇超声处理法，同样可得到较好的提取效果，考虑到碱性氯仿回流法为生物碱的一般提取方法，且索氏提取器具有良好的提取效率，故本文采用此方法。
4．3 薄层色谱系统的选择：经筛选优化，结果以本文展开系统对荷叶中生物碱分离最好。展开后的薄层板喷以稀碘化铋钾试液验证分离效果，得到的色谱轨迹与254nm紫外光下检测到的相同。
4．4 由表看出，不同批次荷叶中荷叶碱的含量相差较大，其与产地栽培、采收加工、贮藏时间等因素间的关系，尚有待进一步考察。