HPLC法测定蛇胆川贝散中牛磺胆酸钠的含量

摘要 目的：测定蛇胆川贝散中牛磺胆酸钠的含量。方法：采用HPLC法，流动相为甲醇-0.4％磷酸二氢钾溶液(60：40)，检测波长210nm。结果：牛磺胆酸钠在2～10μg范围内呈良好线性关系，回归方程Y=338402.1X+140.79；平均回收率为98.47％，RSD=O.80％(n=6)。结论：本法简便、快捷、准确，可作为该制剂的质量控制标准。
关键词：HPLC法；蛇胆川贝散/分析；牛磺胆酸钠；含量测定
蛇胆川贝散是由蛇胆汁、川贝母两味中药组成，具有清肺止咳、除痰等功效，用于肺热咳嗽、痰多等症。其收载于《中国药典》2000年版一部，但其上只有薄层色谱法，而无定量方法。本文采用HPLC法测定了该品中蛇胆汁的有效成分牛磺胆酸钠含量，实验结果表明，本法简便、快捷、准确，可作为该制剂的质量控制标准。
1 仪器与试药
PE200高效液相色谱仪(美国)；牛磺胆酸钠对照品，美国Sigma生产，批号CAS145．42—6；甲醇为色谱纯，
其余试剂均为分析纯；蛇胆川贝散样品，广东省佛山冯了性药业有限公司生产。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
大连依利特C-18(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-0.4％磷酸二氢钾溶液(60：40)；检测波长：210nm；柱温：室温；流速：1.0mL／min；进样20μL。
2．2 供试品溶液的制备
取本品装量差异项下内容物，混匀，取1.5 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相约20mL，超声处理30min．放冷，加流动相至刻度，过微孔滤膜作为供试品液。
2．3 对照品溶液制备
取牛磺胆酸钠对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。
2．4 线性关系试验
分别精密吸取对照品溶液1OμL、20μL、30μL、40μL、50μL进样测定，以测得峰面积为纵坐标、对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程：Y=338402.1X+140.79，相关系数为r=0.9995，表明牛磺胆酸钠进样量在2～10μg范围内呈良好线性关系。
2．5 精密度试验
取对照品溶液(O.2O54mg／mL)连续进样5次(进样量为20μL)，测定牛磺胆酸钠峰面积。结果RSD为0.95％。
2．6 重复性试验
取供试品(批号为0306019)5份，按样品测定法测定。结果重复性良好，RSD=0.85％(n=5)。
2．7 加样回收试验
采用加样回收法，精密称取已知含量的供试品(批号为0306019)，分别精密加入牛磺胆酸钠对照品，按样品测定方法测定，计算得平均回收率为98.47％，RSD=0.80％(n=6)。
2．8 阴性对照试验
照样品测定法测定蛇胆川贝散阴性对照液(缺蛇胆汁药材)，结果阴性对照液在牛磺胆酸钠对照品相同保留时间位置未见有相同保留时间吸收峰，说明蛇胆川贝散中其他组分对本方法测定牛磺胆钠含量无干扰。
2．9 样品测定
分别精密吸取对照品液与供试品液各20μL进样，采用外标法计算含量，样品测定结果。
3 讨论
色谱条件的选择依据：吸取对照品液测定紫外吸收光谱，其最大吸收峰在210nm，故选该波长测定含量。牛磺胆酸钠在选定色谱条件下，色谱峰对称且尖，保留时间0.5min，阴性对照在牛磺胆酸钠保留时间处基本无干扰，供试品中牛磺胆酸钠与相邻色谱峰达到完全分离。
本文采用超声处理提取方法，实验结果表明，超声提取30min，样品中的牛磺胆酸钠已基本提取完全，且分离效果较好。本法简便、快捷、阴性试验无干扰，结果可靠，重现性好，可作为该制剂的质量控制指标。