毛细管电泳法测定石楠叶中有效成分的含量

石楠叶有祛风、通络、益肾之功效。其中的两种有效成分齐墩果酸和熊果酸在抗炎、保肝、止疼、强心等许多疗效方面已被现代科学证实。目前石楠叶中熊果酸的测定方法有薄层色谱法。本实验采用毛细管电泳法测得了石楠叶中齐墩果酸和熊果酸异构体的含量
1 实验部分
仪器与药品：美国Waters Quanta 4000E毛细管电泳仪。毛细管(河北永年光导纤维厂，直径75μm)总长60cm，有效长度52cm。数据处理由Waters Millennium 2010色谱管理软件完成。Na2HPO4，Na2B4O7，SDS，95%乙醇均为分析纯。齐墩果酸和熊果酸标准品购自中国药品生物制品检定所。石楠叶购于河北保定市药材公司。水为双蒸馏水。
2 方法与结果
2．1 实验方法：实验前，毛细管依次用0.1mol／L铬酸、重蒸馏水、0.1mol／L KOH、重蒸馏水各冲洗5min，然后再用缓冲溶液冲洗4min。在每两次运行之间，毛细管仅用缓冲溶液冲洗4min。3次运行后，毛细管需用上面方法清洗一回。运行电压为16kV，214nm 紫外检测，重力进样时间为5s，实验温度是26℃。实验前缓冲溶液用微滤膜过滤。
2．2 优化的实验条件：综台考察缓冲溶液组份浓度，SDS浓度及有机溶剂(乙醇)含量对齐墩果酸和熊果酸标准混合物分离的影响。确定了最佳的缓冲溶液体系为15mmo|／L Na2HPO4、15mmol／Lna2B4O7、10mmol／L SDS、5 %乙醇的电解质溶液。在此条件下，齐墩果酸和熊果酸谱峰能完全分开，分离度达到0.98。
2．3 标准曲线的绘制：精确称取适量的齐墩果酸和熊果酸对照品，分别溶于一定量乙醇中得标准溶液以此标准溶液为基础再配成不同浓度的标准品溶液，在最佳分离条件下进行测定。以谱图中峰面积校正值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。两种物质的线性回归方程(校正峰面积mV／s，浓度g／mL)和相关系数(r)及线性范围为：
齐墩果酸Y=一28.5+13.4×10000(r=0.997)线性范围为0.53～3.56mg/mL。
熊果酸Y=一14.8+16.9×10000X(r=0.996)线性范围为0.57～4.12mg／mL。
2．4 样品测定：精确称取3.94 g石楠叶碎块，放人索氏提取器中，用80mL 95%乙醇提取1、5h，将提取液浓缩并定容至50mL得样品溶液。在最佳分离条件下运行样品溶液，测得石楠叶中齐墩果酸含量(g／g)为2.79％，RSD=2.67%(n=5)；熊果酸含量(g／g)为7.98%，RSD=2.44%(n=5)。
2．5 回收率测定：加样回收率测定结果，齐墩果酸为102%，RSD=2.85% ( =4)；熊果酸为104％，RSD= 3.21% (n=4)。
3 讨论
毛细管电泳法测定石楠叶中齐墩果酸和熊果酸的含量具有快速、准确、微量优点。其中齐墩果酸含量为首次给出。此法测得的熊果酸含量高于其它方法测定值，说明用乙醇提取效率好于甲醇。本文提供了评价石楠叶药材及相关药物质量的一种可靠分析手段。