HPLC测定生乳灵中阿魏酸的含量

生乳灵是由当归、地黄、玄参、穿山甲、党参、黄芪、知母、麦冬等组成的中药复方口服液制剂，收载于卫生部药品标准中药成方制剂第六册。该标准中无含量测定方法，为提高质量标准，加强产品控制，本文选用了高效液相色谱法，测定处方中君药当归中的主要成分阿魏酸的含量，该方法简便、准确，重现性好，可作为该制剂的含量测定方法。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：日本岛津LC一10AT；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0773—9910，供含量测定用)；生乳灵(贵州瑞康制药有限公司，批号：030901)；所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 对照品溶液的制备
精密称定阿魏酸对照品10mg，加水定容至100ml，作为对照品溶液。
2．2 样品溶液的制备
精密量取本品50ml，加盐酸(0.1mol/L )40ml，搅拌，移至分液漏斗中，用***提取3次，每次45ml，合并提取液，加2％碳酸钠液40ml提取，分取碳酸钠层，用盐酸(2.0mol/L )调pH至2～3，移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
2．3 阴性对照溶液的制备
按处方取除当归外的其它几味中药饮片，依处方工艺制成溶液，再按上述样品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2．4 色谱条件
色谱柱：HYPERIL ODS c18柱(5.0×250mm，5μm)；流动相：水一冰醋酸一正丁醇(347：1：5)；流速1.5ml/min；检测波长：313nm；柱温：40℃ ；进样量：20μL。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。在样品色谱图中，与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰，而阴性在此保留时间无峰干扰。
2．5 线性关系考察
分别精密量取上述对照品溶液3.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0m1分别置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，即得不同浓度的阿魏酸对照品溶液。吸取各浓度的溶液分别进样20μL，注入液相色谱仪，按上述条件进行测定，以浓度一峰面积绘制标准曲线，线性回归得回归方程：Y=4215138.2X-12705.1(n：6)，相关系数r=0.9997。结果表明，阿魏酸在0.12μg-1.0μg的范围内呈良好的线性关系。
2．6 精密度试验
精密吸取上述稀释后的同一对照品溶液20μL，连续进样5次，测得对照品阿魏酸保留时间与峰面积的RSD分别为0.8％和0.6％。
2．7 重复性试验
精密量取同一批号样品一式5份，分别按样品测定方法制备供试品溶液，在给定的色谱条件下进行测定，外标峰面积法计算阿魏酸的含量，结果平均含量为1.66mg/100ml，RSD为1.12％ (n=5)。
2．8 加样回收率试验
精密量取已知含量的生乳灵(批号：030901)25ml，分别加入阿魏酸对照品适量，按“2．2样品溶液的制备”项制备供试品溶液并分析，。
2．9 样品测定
取样品溶液，按本文色谱条件测定，以外标峰面积法计算样品中阿魏酸的含量，共测定9批样品。
3 讨论
3．1 检测波长的选择
取阿魏酸对照品，加水制成10mg/ml 的溶液，在200-400nm波长范围内扫描，结果在313nm和292nm波长处有最大吸收。文献报道大多采用313nm为检测波长，故选择313nm作为检测波长。
3．2 流动相的选择
文献报道流动相均采用酸性系统。通过对多种流动相进行比较，其中以水一冰醋酸一正丁醇溶液的分离效果较理想。并可调整正丁醇的量，使阿魏酸与其它干扰物质分离开。