双波长薄层扫描法测定制霉洗剂中苦参碱的含量

　　目的：测定制霉洗剂中苦参碱的含量。方法：采用双波长薄层扫描法。结果：本品平均回收率为99.58%，RSD为1.01％，5批样品中苦参碱的平均值为1.18g/L。结论：方法简便、快速、灵敏度高，可用于该品的质量控制。
苦参碱；制霉洗剂；薄层扫描；含量测定
制霉洗剂是由苦参、黄柏、土茯苓等9味中药制成的妇科外用液体制剂，具有清热燥湿，杀虫止痒的作用。临床上用于湿热带下，皮肤瘙痒症的治疗。其中苦参的有效成分苦参碱具有明显的清热燥湿作用。本文采用双波长薄层扫描法测定苦参碱的含量，现报道如下。
1 仪器与试剂
CS 9000双波长薄层扫描仪(日本岛津公司)；毛细点样管(美国Drummond公司)；点样仪(武汉分析仪器厂)；苦参碱对照品(中国药品生物检定所)；其他试剂均为分析纯；制霉洗剂(本院制剂室，批号010113，010123，010301，010313，010408)；硅胶G板、硅胶G(青岛海洋化工厂)。
2 方法与结果
2．1 溶液的配制
2 1．1 苦参碱对照品液的制备 精密称取苦参碱对照品2.14mg，加氯仿适量，转移至2mL{瓶中并稀释至刻度即得。
2．1．2 制霉洗剂样品液的制备 精密量取制霉洗剂10mL置于分液漏斗中，用氨水调pH 11，然后用氯仿50mL分次萃取，每次l0mL。合并萃取液，水浴挥去大部分氯仿后转移至2mL量瓶中，加氯仿至刻度即得。
2．1．3 制霉洗剂阴性对照液的制备 除苦参外，其他组分按原制备方法制备，按2．1．2项下方法制得阴性对照液备用：
2．2 薄层层析及扫描要求
2．2．1 吸附剂与展开剂0.4％CMC-Na硅胶G板晾干后于105℃ 烘箱内活化30min后置干燥器中备用。以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨水(2：3：4：0.2)为展开剂，充分饱和60min，上行展开12 errt，碘化铋钾试液喷雾显色，再喷以少量0.05mol/L亚硝酸钠乙醇液至斑点显色清晰，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，放置2h后扫描。
2．2．2 薄层扫描条件及仪器参数 将显色后的薄层板在390～600nm波长范围内双波长反射锯齿式扫描，λs=500 nm，λR=630nm，散射参数Sx=3，狭缝1.0 mmX 1.0mm。
2．3 标准曲线的绘制 用微量进样器分别量取对照品溶液2，4，6，8，10μL，各两点，分别点于同一硅胶G板上，按2．2项下条件层析并扫描测定，以斑点峰面积均值对点样量绘制标准曲线，得回归方程为：Y=20119.408+6787.229X，r=0.999(n=5)。样品含量在2.14～l0.70μg范围内呈良好线性关系。直线不通过原点，因此用外标两点法计算含量。
2．4 稳定性实验 取苦参碱对照品液5μL点于薄层板上，按上述薄层条件展开，显色放置2 h后，每隔30min扫描1次。结果在2h内苦参碱斑点的峰面积值保持稳定，RSD为2.22％(n=5)。
2．5 精密度试验测定 同一薄层板上的5个相同量(5μL)的对照品的峰面积值，结果RSD为1.71％(n=5)：
2．6 干扰因素的考察 在同一板上，依次点苦参碱对照品液、样品液、阴性对照液各5止，按薄层条件展开。显色后可见样品与对照品相应位置上显橙红色斑点，而阴性对照液在相应位置上无对应斑点。
2．7 回收率的测定 精密量取一定量的样品液，分别定量加入苦参碱对照品，以未加对照品的样品液为对照，按样品测定的方法测定苦参碱的含量。结果平均回收率为99.58％，RSD为1.01％(n=5)。
2．8 样品含量测定取样品液5μL，对照品液4，5μL点于同一板上，交叉点样，按2．2项下条件层析扫描测定，用外标两点法计算。
3 讨论
曾用苯-丙酮-甲醇(8：2.5：0.5)展开，但分离不好，斑点不集中。用苯-乙酸乙酯-丙酮-浓氨水(3：3：1：0.1)系统展开，出现紧邻分离的斑点有一条弧形现象。采用苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨水(2：3：4：0.2)展开系统，展开前充分饱和分离好，斑点集中。经与稀碘化铋钾试液，改良碘化铋钾试液，碘化铋钾试液等显色剂比较，选择本文显色剂，可使斑点显色充分，无空心，放置2 h后测定，使斑点颜色更均匀，清晰，稳定性显著提高。