知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎。2005版《中国药典》采用高效液相色谱法,以菝葜皂苷元为指标成分测定其含量。文献报道的方法有高效液相色谱法和薄层扫描法。
一、高效液相色谱法
2005版药典知母含量测定项:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(95:5)为流动相;蒸发光散射检测器检测。理论板数按菝皂苷元峰计算应不得低于1000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇25ml,称定重量,超声处理(功率200W,频率30KHz)40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液10 ml,蒸干,加水10ml,盐酸1ml,加热回流2小时,取出,冷至室温,边振摇边滴加40%氢氧化钠溶液至溶液颜色由橙色突变为橙红,用三氯甲烷振摇提取2次,每次30ml,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至10ml量瓶中并稀释至刻度,摇匀,即得。
文献报道的HPLC法,具体介绍如下:
王天勇等采用反相高效液相色谱法测定了知母中菝葜皂苷元的含量。色谱条件:色谱柱Shim-pack CIC - ODS 150×6.0mm,5μm,带有前置保护柱。流动相为甲醇;RID-6A检测器;流速0.8mL/min;柱温为室温。药材处理:乙醇提取→盐酸水解→氯仿萃取。杨宁莲等测定知母及其制剂中菝葜皂苷元的含量以及孙海胜等采用反相高效液相色谱法测定消渴清颗粒中菝葜皂苷元的含量时也采用相同的方法。
二、薄层扫描法
曹爱民等采用薄层扫描法测定知母不同炮制品中菝葜皂苷元的含量。扫描条件:反射式锯曲扫描,线性因子Sx=3,测定波长入s=446nm,参比波长入R=600nm。层析条件:硅胶G板,展开荆:苯-丙酮(9:1)上行展开。显色剂:8%香草醛无水乙醇液-70%硫酸液(0.5:5)。样品制备:95%乙醇回流提取→醋酸乙酯萃取→盐酸水解。
韩丽萍等采用双波长薄层扫描法测定知母药材及制剂中菝葜皂苷元的含量。薄层条件:硅胶G板,以正己烷 -乙酸乙酯(1:1)为展开剂, 8%香草醛无水乙醇溶液-70%硫酸溶液(1:5)为显色剂。测定波长445 nm,参比波长600nm,线性化因子SX=3,扫描步间距Y=0.04,最小宽度8mm,最小面积100,锯齿法扫描。样品制备:乙醇超声提取→盐酸水解→氯仿萃取。