利福平为3-甲基]-利福霉素。2005版《中国药典》二部收载的含量测定方法为高效液相色谱法。利福平片和利福平胶囊都采用此法。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》二部利福平含量测定项下：
色谱条件及系统适用性试验：用辛基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.075mol/L磷酸二氢钾溶液-1.0mol/L枸橼酸溶液（30：30：36：4）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按利福平峰计算不低于1500。
文献报道的方法，流动相系统一般为缓冲盐溶液。
李艳枫等用高压液相色谱检测利福平胶囊的含量。采用日本岛津LC-10A液相色谱仪，SPD-10AV检测器，C-R6A数据处理仪。色谱柱：Lichrospher 100，RP-8(5μm)250mm×4.6mm；流动相：0.O75mol/L KH2PO4-乙腈-甲醇(1：1：1)；流速：1.Oml／min；检测波长：254nm；柱温：4O℃。用本法测定利福平胶囊含量与现行中国药典方法对比，结果表明：本法测定速度快，用样量少，结果准确，重现性好。
杨威测定肠炎灵胶囊中利福平的含量。采用岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪、SPD-10Avp紫外检测器、Anastar色谱工作站。色谱柱：Dupond C8(250×4.6mm，5μm，流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(45：55)，流速：lml／min,检测波长：340nm。
李璐等测定复方利福平片中利福平、异烟肼的含量。采用美国SSI公司的222D型高效液相色谱仪，美国Hi-Tech500型可变波长紫外检测器。CHROMKING色谱数据工作站(5.0版)。色谱柱为KromasilCl8，流动相为甲醇-0.02mo1/L 磷酸氢二钠(80：20，用磷酸调pH为4.5)，流速为10m1/min。检测波长为254nm。
二、其它
陈文山等采用鲁米诺-过氧化氢化学发光体系测定利福平。基于鲁米诺在碱性条件下可以被H2O2氧化产生化学发光，利福平对此化学发光具有增敏作用这一现象，结合流动注射技术建立了一种直接测定利福平的流动注射化学发光新方法。该方法的线性范围在1.0×10-6～2．0×10-8g/mL，检出限为3.0×10-9g/mL，对5.0×10-7g/mL的利福平连续进行11次平行测定，其相对标准偏差为3.0％。该法已成功测定了利福平胶囊及眼药水中利福平的含量。
另外，徐丽美等采用一阶导数光谱法测定利福平胶囊的含量；回瑞华等采用三波长分光光度法测定利福平的含量等。