近十几年来,有关土贝母及其制剂、土贝母苷甲的含量测定方法报道极少,2000年以后方法大多为2005版药典所载的HPLC法;之前采用的多为分光光度法。现简单介绍HPLC法所采用的仪器、色谱柱(最常用)以及分光光度法。
一、高效液相色谱法(HPLC)
⑴2005版药典土贝母含量测定项:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以65%的甲醇为流动相;检测波长为214nm。理论板数按土贝母苷甲峰计算应不得低于1500。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过4号筛)约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,称定重量,超声处理30分钟,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25 ml,水浴蒸至无醇味,加水10ml,移入分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取4次(20ml,20ml,10ml,10ml),合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
⑵ 2000年魏有良等采用HPLC法测定土贝母中土贝母苷甲含量:SP8810型高效液相色谱仪;SP-100型紫外分光检测器;SP-4400型积分仪(美国);岛津UV-2100型分光光度计(日本)。色谱条件:色谱柱RP-C B型220×4.6mm(大连化物所),流动相:7O%甲醇,流速;0.8ml/min,检测波长214nm,衰减4。样品处理:用水浸提,取续滤液。实验用SP8810色谱仪(柱4.6×220mm)和日立-7100型色谱仪(柱4×150mm)测定,土贝母苷甲的保留时间分别为11min和6min,前者板数为2121,后者板数为1426。土贝母苷甲易溶于水,实验中还发现,用水作溶媒提取,可以避免大量脂溶性组分的干扰,分离完全。如有甲醇介入,则干扰组分多。
二、分光光度法
⑴1993年王永青等考察了土贝母甙甲的定量分析方法:仪器分光光度仪,日本岛津UV-265FW。薄层层析条件:氯仿-甲醇-水(48:25:7,下层)为展开剂,碘蒸汽显色。比色条件:吸收波长474nm。10%香草醛冰醋酸溶液。生药中甙甲的测定,样品处理比较简单:70%乙醇回流提取;甙甲注射剂的测定,样品直接用甲醇溶解点样;甙甲栓剂的测定,样品需用乙酸乙酯加热处理,离心后取上清液点样。
⑵1999年魏有良等研究了土贝母皂苷原料及其注射液中土贝母总皂苷的含量测定方法。WFZ一800D2型分光光度仪(北京第二光学仪器厂)。用5%香草醛冰醋酸溶液-脱水硫酸为显色剂,在90℃加热显色,测定波长540nm。样品处理:土贝母皂苷原料乙醇水浴加热取续滤液甲醇溶解;土贝母皂苷注射液:水浴水浴蒸干,甲醇溶解。
虽然有关土贝母及其制剂、土贝母苷甲的含量测定方法报道极少,但从文献中可知,其含量测定的趋势当然是HPLC法的应用。与分光光度法相比,在土贝母苷甲的含量时,不仅操作简单,而且重复性好、专署性强。
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