蛇床子为伞形科植物蛇床Chidium monnieri(L.)Cuss.的干燥成熟果实。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其蛇床子素的含量。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》蛇床子含量测定项下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（65：35）为流动相；检测波长为322nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不得低于2500。
供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25ml，密塞，称定重量，放置2小时，超声处理（功率300W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量。精密量取上清液5ml，置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
HPLC法测定蛇床子及其制剂中蛇床子素的含量，制备样品时一般以50%乙醇、碳酸氢钠饱和溶液、甲醇等为提取溶剂，按流动相系统分类介绍：
A：甲醇-水
此系统应用最多，常用的比例为：
①Agilent 1100 高效液相色谱仪(美国)；色谱柱为YWG-C18 (10μm,4.6mm×250mm)；流动相为甲醇-水(80：20)；检测波长322nm；柱温25℃。
②Waters高效液相色谱仪；C18色谱柱（Xterra column，pH1～12，5μm，3.9mm×190mm）；流动相为甲醇-水(75：75)；检测波长322nm；柱温28℃。
③WATERS 515 高效液相色谱仪；色谱柱为Kromasil C18柱(4.6mm×250mm, 5μm)；流动相为甲醇-水(73 ：27)；检测波长322nm；柱温35℃。
④日本岛津LC-10A 高效液相色谱仪；Polaris C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇-水(62.5：37.5)；检测波长为323nm；柱温为30℃。
⑤日本岛津LC-10A 高效液相色谱仪；流动相为甲醇-水(75：25)；检测波长为325nm；柱温为室温。
⑥Waters 2460/2996高效液相色谱仪；流动相：甲醇-水(70：30)；检测波长310nm；柱温30℃。供试品溶液的制备：取本品5ml,加硅胶(60～200目,下同)3g拌匀,70℃烘干,移置硅胶柱(1～115cm,1g,干法装柱)上,用石油醚( 60～90℃)-醋酸乙酯(65：35)混合溶液100 ml洗脱,洗脱液低温挥干,残渣加甲醇溶解并定容至5ml,摇匀,即得。（黄志海等，“HPLC法测定复方苦参洗剂中蛇床子素的含量” 中药材，2005，28（5））
B：乙腈-水
①Waters 510高效液相色谱仪；色谱柱为Hypersil C18柱（5μm,4.6mm×250mm）；流动相为乙腈-水（54：46）；检测波长321nm；柱温为室温。
②Waters 510/484/745B 色谱系统；Hypersil C18分析柱(150mm×4.6mm, 5μm)；流动相：乙腈-水(54：46)；测定波长321nm；柱温室温。供试品溶液的制备：精密吸取本品5mL,置分液漏斗中,用***振摇提取3次,每次20mL,合并***提取液,用5%氨溶液10mL洗涤,静置分层,弃去氨溶液,倾取***上清液。剩余少量乳化层用***洗涤2次,每次5mL。合并***液,挥干, 残渣加乙醇溶解并转移至25mL 量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过。（朱山寅等，“HPLC 法测定肤阴净洗液中蛇床子素的含量”，中草药，2004，35（5））
③Waters 系列高效液相色谱仪；Kromasil-C18色谱柱(5μm,4.6mm×150mm,北京潮声公司)；流动相为乙腈-水(52：48)；柱温为室温；检测波长322nm。
C：甲醇-水-磷酸
①Waters 600 高效液相色谱仪；流动相为甲醇-水-磷酸(375：125：1)；检测波长322nm；柱温室温。
②Agilent-1100 高效液相色谱系统；色谱柱为Nova-parkC18(250×4.6mm, 4μm ) (大连依利特科学仪器有线公司装填)；流动相：甲醇-1%磷酸溶液(65：35)；柱温室温；检测波长320nm。供试品溶液的制备：精密量取本品25ml, 加水25ml, 用***振摇提取5次,每次20ml,合并***液,蒸干,残渣加石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(2：8)少量溶解, 加于中性氧化铝柱(内径2cm,100～200目,15g)上, 用石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(2：8)洗脱, 收集洗脱液80ml,于水溶上蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。（游勇基等，“高效液相色谱法测定祛风胜湿酒中蛇床子素的含量”，海峡药学，2002，14（5））
D：甲醇-水-四氢呋喃
LC-10A高效液相色谱仪；色谱柱:Shimpack CLC - ODS (150mm×4.6mm,5μm)，保护柱：自填国产YWGC18H37(20mm×4.6mm,10μm)；流动相：甲醇-水-四氢呋喃( 70：40：5)；检测波长317nm；柱温35℃。
其它条件，如：孙海峰等HPLC测定祛腐二香栓中蛇床子素含量时，采用日立638250型HPLC仪。色谱柱为 Elite Hypersil ODS 柱( 5μm，4.6mm×150mm)；流动相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(62：38)；检测波长322nm；柱温25℃。
叶晓平等用RP-HPLC法同时测定蛇床子中蛇床子素、欧芹属素乙和异茴芹素的含量。采用Agilent 1100 高效液相色谱仪；色谱柱为Vercopark Inertsil N-5 ODS (4.6mm×250mm,5μm)；流动相为1%醋酸-甲醇(梯度为0～30min1%醋酸95%～5%)；检测波长254nm；柱温30℃。
李遇伯等立测定骨疏丹中淫羊藿苷和蛇床子素含量，采用P200 Ⅱ型高效液相色谱仪；色谱柱为Hypersil ODS2 (250mm×4.6mm,5μm,大连依利特科学仪器有限公司)；流动相为甲醇-0.4%醋酸水溶液(65：35)；检测波长为322nm；柱温为室温。
二、薄层扫描法
薄层扫描法测定蛇床子素的含量时，常用的展开剂为正己烷-醋酸乙酯和苯-乙酸乙酯。
曹智勇测定冻疮涂膜剂中蛇床子素的含量，薄层色谱条件为：硅胶G薄层板；以正己烷-醋酸乙酯(6：1)为展开剂。薄层扫描条件为：λs=320nm,λR=260nm,线性参数SX=3 ,狭缝1.2mm×1.2mm,双波长反射锯齿形扫描。供试品溶液的制备方法：精密吸取本品5mL,加0.1mol/ L 的氢氧化钠溶液20mL,边加边搅拌,静置1小时,滤过,残留物再加氢氧化钠溶液15mL提取2次,水浴加热提取5分钟,滤过,合并氢氧化钠溶液,以盐酸调节pH3～4,以***提取3次(40、30、30mL),合并***液,回收***,残留物以甲醇溶解并定容至10mL量瓶中,作为供试品溶液。
冯盛等测定还春补力片中蛇床子素的含量，薄层色谱及薄层扫描条件：吸附剂：Merk 硅胶G60薄层板；展开剂：苯-乙酸乙酯(30：1)；显色：于紫外光灯365nm下检视。采用双波长反射扫描法, λs=325nm,λR=271nm。
三、薄层荧光扫描法
刘杰采用薄层荧光扫描法测定气血葆口服液中蛇床子素的含量，采用硅胶G薄层板, 以苯- 醋酸乙酯(30：1)为展开剂,采用荧光线性扫描, 光源为汞灯, K400滤光片,λEx=313nm,狭缝0.5mm×5mm,扫描速度5.0mm/s。
赵韶华等采用荧光扫描法测定八子补肾胶囊中蛇床子素的含量，采用荧光透射法线性扫描，激发波长为320nm，滤光片为1号。
庞志功等文以β-环糊精(β-Cyclodextrin, 简写为β-CD) 包含荧光法对原药蛇床子中所含蛇床子素进行含量测定, RF540 型荧光分光光度计(日本岛津),展开剂为苯-乙酸乙酯（9：1），刮取的蛇床子素斑点用95%乙醇分次洗脱。激发波长(λex ) 发射波长(λem ) 分别为320nm和420nm。
四、气相色谱法
宁江松采用气相色谱法测定净阴灵中蛇床子素的含量。日本岛津公司生产的GC- 14B 型气相色谱仪；色谱柱为3mm×200cm玻璃柱，担体为80～100目的Chromosorb W(AWDMCS)；固定相为5%的SE-30；柱温250℃；检测器FID；载气为氮气；流速为30ml/min；氢气90kPa；空气50 kPa。供试品溶液制备：精密量取净阴灵50ml,置分液漏斗中,用氯仿提取5次,每次50m l,合并氯仿提取液,用无水硫酸钠适量脱水,滤出氯仿液,滤楂用少量氯仿洗涤,合并滤液和洗液, 用旋转蒸发器低温蒸干,残渣加氯仿使溶解。