气相色谱法测定菝葜中薯蓣皂苷元含量

　　摘要:目的：建立菝葜中薯蓣皂苷元的含量测定方法。方法：程序升温气相色谱法,CP Sil 5CB熔融石英毛细管柱,FID检测器。结果：薯蓣皂苷元在0.20～5.0μg 范围内具有良好的线性关系, r=0.9998 ,测定方法平均回收率为97.20%。结论：本方法有较高的灵敏度和回收率,可用于菝葜中薯蓣皂苷元的含量测定。
关键词:菝葜;薯蓣皂苷元;气相色谱法
菝葜( Smilax china L1) 又名金刚藤,为百合科菝葜属植物,分布于华东、中南、西南等地。传统医学认为其根茎具有药用价值,有抗锥虫、利尿解毒、祛风利湿、解毒散瘀的功效。经现代药理学的初步研究,证明有一定的抗炎镇痛及抗肿瘤作用。薯蓣皂苷元为菝葜属植物中已报道的几种主要甾体皂苷的苷元,因此可通过测定薯蓣皂苷元的含量对菝葜药材的质量进行控制。目前薯蓣皂苷元的定量分析方法主要有库仑滴定法、分光光度法、薄层扫描法、气相色谱法及高效液相色谱法等,而菝葜中薯蓣皂苷元的测定,目前尚未见报道。本实验研究了菝葜药材中薯蓣皂苷元的气相色谱测定方法,取得满意结果,可为药材质量控制提供可行依据。
1 　仪器和试剂
岛津GC29A气相色谱仪;C2R3A色谱数据处理机;FID 检测器;OPGU2500S 氢气发生器; 十万分之一电子天平(Mettler AE240) ; 高纯氮;薯蓣皂苷元对照品(中国药科大学刘静涵教授提供,纯度98%)。
2 　方法和结果
2.1 　色谱条件
色谱柱:熔融石英毛细管柱30m×0.32mm×0.25μm; 固定相:CP Sil 5CB(极性相当于ov-1) ;程序升温;检测器温度:300℃;载气流量:0.4 L/ min ;分流比:20∶1;灵敏度: Range = 10,att = 1 ;进样量:4μl ;纸速:3mm/ min。
2.2 　样品溶液的制备
精密称取干燥的菝葜药材适量,粉碎至中粉,加1.5mol/L盐酸水溶液在沸水浴中水解4h,过滤去除酸液,并将药材用水洗至中性,烘干后置索氏提取器中用石油醚提取9h,提取液蒸除石油醚,所得残渣用甲醇定容。
2.3 　标准曲线及线性范围
精密称取薯蓣皂苷元对照品62.5mg ,置于50ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,作为贮备液。分别吸取薯蓣皂苷元贮备液0.4、2、4、6、10ml ,置于10ml 容量瓶中,以流动相溶解并稀释至刻度。按上述色谱条件分别进样4μl(n=2) ,用色谱数据处理机记录峰面积,以样品浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得标准曲线为:Y=36882X2447.71(r=0.9998) ,线性范围:0.20μg～5.0μg。
2.4 　进样精密度试验
按对照品溶液的制备项下操作,配制成一定浓度的标准溶液,连续进样5次,每次20μl ,测得各次峰面积积分值,计算得RSD 为2.1% ,表明仪器稳定,进样精密度良好。
2.5 　供试品溶液稳定性实验
按供试品溶液的制备项下操作,配制成一定浓度的供试品溶液,分别于0、2、4、8、12h进样,峰面积积分值RSD为2.7% ,隔天进样1次,共5天,RSD为2.8% ,说明供试品溶液在5日内是稳定的。
2.6 　重复性试验
精密称取同一批样品,按上述供试品溶液的制备项下操作,配制成高、中、低3种不同浓度的样品溶液各3份,定容至2ml。进样测定,RSD分别为2.5%、2.7%、3.0% ,表明高、中、低浓度的样品含量测定重复性良好。
2.7 　回收率试验
分别称取已知含量的菝葜药材样品,精密加入等量的薯蓣皂苷元对照品,按供试品溶液的制备方法制备高、中、低3 种不同浓度的样品溶液各3份,定容至10ml。依次进样,回收率分别为98.75%、96.29%、95.96% , RSD分别为4.2%、1.4%、2.3%。
2.8 　样品测定
分别精密称取10批菝葜药材,按上述供试品溶液的制备方法制备样品溶液,依上述GC方法操作.
3 　讨　论
3.1 　由于菝葜药材中薯蓣皂苷元含量偏低,杂质干扰大,一般的填充型气相色谱柱难以达到分离要求, 而需采用毛细管柱。比较非极性的CP Sil 5CB 固定液及中等极性的CP Sil 19CB 固定液,发现前者更适宜本样品分离。
中药材成分复杂,杂质较多,需采取程序升温方法。因样品沸点较高,为使尽快出峰,需要较高的最终柱温,综合考虑以280℃为宜。初始柱温和升温速率分别在230℃～260℃和1℃/min～15℃/ min之间选择,经反复实验表明,初始柱温250℃、升温速率10℃/ min 条件下,样品分离良好。
3.2 　通过对GC 法各方面进行考察,其精密度、稳定性、准确性等指标均能符合要求,且有较高的专属性和灵敏度,说明GC法可用于测定菝葜药材中薯蓣皂苷元的含量。
3.3 　菝葜中多种甾体皂苷为其主要活性成分,而薯蓣皂苷元为菝葜中几种主要甾体皂苷的母核皂苷元,因此可通过测定薯蓣皂苷元的含量对菝葜药材的质量进行控制。