GC法测定肿痛气雾剂中的薄荷脑含量

摘要：目的：建立肿痛气雾剂中有效成分薄荷脑含量的气相色谱测定法。方法：色谱条件为1909IJ-413HP-5石英毛细管色谱柱，程序升温，柱温60℃，保持5min，以每分钟5℃的升温速率升至100℃，保持2min，分流比为25：1，FID检测器，内标物为萘。结果：薄荷脑浓度在0.01mg/ml～mg/ml范围内呈线性关系（r=0.9998），加样平均回收率为101.70%。RSD为2.08%（n=5）。结论：该方法前处理简单、灵敏度高、线性范围宽、分离效果好，结果准确可靠。
关键词：肿痛气雾剂；薄荷脑；气相色谱法
新药肿痛气雾剂由七叶莲、三七、雪上一枝蒿、薄荷脑等组成，对跌打损伤、肩周炎、痛风、风湿关节痛及乳腺小叶增生等疾病有显著疗效。试行标准中，采用GC法测定薄荷脑的含量，前处理方法复杂，时间长等。本文进行了薄荷脑含量测定方法的再研究，结果如下。
1 仪器与试药
美国Agilent公司6890气相色谱仪系统，包括氢火焰离子化检测器；7683全自动进样器；色谱柱：1909IJ-413HP-5石英毛细管柱。薄荷脑对照品(批号0728-200005)， 由中国药品生物制品检定所提供;肿痛气雾剂(批号20040126)，由云南省药物研究所制药厂提供；所用试药、试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 选择进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，分流比25:1，柱温60℃，保持5min，以每分钟5℃升温速率升至100℃，保持2min作为测定薄荷脑的系统条件。
2.2 系统适用性实验 按2.1中的色谱条件，分别取对照品溶液、内标物萘溶液、供试品溶液按1μl进样分析。被测组分分离效果较好，薄荷脑达基线分离，理论板数按薄荷脑峰计算大于120000。
2.3 线性关系考察 精密称取薄荷脑对照品57.07mg，用无水乙醇定容于10ml容量瓶中.精密称取萘内标物513.55mg，用无水乙醇定容于50ml容量瓶中。精密量取上述对照品溶液0.2ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、2.0 ml，并分别精密加入上述萘溶液1ml，置于10ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度;吸取1.0μl注入气相色谱仪进行测定，每个浓度进样1次。以薄荷脑峰面积为纵坐标，薄荷脑浓度(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程(n=6)为：Y=809.00X-1.02.r=0.9998.Y-峰面积,X样品浓度(mg/ml)。
以上结果表明，在该条件下，薄荷脑浓度在0.10～1.30mg/ml范围内有良好的线性关系。
2.4 精密度实验 取同一浓度的供试品溶液1.0μl，重复进样8次，以内标法计算，RSD为0.12%，结果表明此方法的精密度较好。
2.5 重复性实验 取同一批号的供试品2.5g6份，分别加入浓度为10.27mg/ml的内标物萘1ml，按含量测定方法分别进行供试品溶液制备、测定，以内标法计算，RSD为0.49%，结果表明此方法的重复性较好。
2.6 稳定性实验 取同一种浓度的供试品溶液，分别于室温0,1,2,3,6,12,24h后进样，7次测定得到的平均值为0.55mg/ml，RSD为0.49%。结果表明在24h内，供试品溶液有较好的稳定性。
2.7 回收率实验 取同一批号已知含量的供试品2.5g6份，分别加入浓度为10.13mg/ml的内标物萘1ml和一定量的薄荷脑对照品溶液，按含量测定方法分别进行供试品溶液制备、测定，结果表明此方法的回收率符合要求。
以上方法学考察结果证明，该方法灵敏度高，精密度好，重现性及回收率变异系数均在3%以下，符合《中药新药研究的技术要求》中“质量标准”部分的规定。
3 讨论
3.1 系统条件的选择 通过查阅资料，我们选择了3个系统条件:（1）检测器为FID;柱温为150℃;进样器温度为230℃;检测器温度为230℃。（2） 柱温的初始温度为120℃，保持2min，先以每分钟2℃的升温速率升至140℃，保持2min，在以每分钟10℃的升温速率升至190℃，保持10min，分流比为20:1。（3）进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，分流比为25:1，柱温为60℃，保持5min，以每分钟5℃的升温速率升至100℃，保持2min。
系统（1）、（2） 测定得到的薄荷脑峰不能达到基线分离；系统（3）测定得到的薄荷脑峰与邻近峰达到基线分离且分离度超过1.5，分离效果好，故采用系统（3）作为测定肿痛气雾剂中薄荷脑含量的系统条件。
3.2 提取溶媒的选择 根据肿痛气雾剂质量标准(试行)首先选择丙酮作为溶剂，出现的溶剂峰复杂，得到的薄荷脑峰不能达到基线分离。考虑到药液里含有乙醇，因此选择了40%、60%、80%、90%及无水乙醇等不同浓度的乙醇作为溶剂进行比较，结果是无水乙醇作为溶剂测定时得到的薄荷脑峰能达到基线分离，且内标物萘在无水乙醇中易溶解。通过系统研究和方法学验证，上述的方法与原来的方法相比较，本法具有前处理简便、灵敏、准确等优点，为其质量控制提供了更科学的依据。