肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight的干燥鳞叶肉质茎。2005版《中国药典》对肉苁蓉和管花肉苁蓉的含量测定分别作了介绍。文献报道的有关肉苁蓉及其制剂的含量方法主要为高效液相色谱法、毛细管电泳法和薄层层析法等。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》肉苁蓉含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-甲醇-0.1%醋酸溶液(10:15:75)为流动相,检测波长为334nm。理论板数按松果菊苷峰计算应不低于4000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约0.5g,精密称定,置50m棕色量瓶中,精密加入流动相25ml,称定重量,浸泡0.5小时,超声处理(功率230W,频率35KHz)40分钟,放冷,再称定重量,用流动相补足减失的重量,摇匀,离心,静置,取上清夜置棕色量瓶中,即得。
管花肉苁蓉含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%甲酸溶液(28.5:71.5)为流动相,检测波长为330nm。理论板数按松果菊苷峰计算应不低于3000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约1g,精密称定,置100m棕色量瓶中,精密加入50%甲醇50ml,密塞,称定重量,浸泡30分钟,超声处理(功率230W,频率35KHz)50分钟,取出,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液置棕色量瓶中,即得。
文献报道的HPLC法色谱条件一般为药典规定的,常用的流动相系统为乙腈-甲醇(水)-醋酸溶液、乙腈-乙酸溶液、乙腈-甲醇-水
张思巨等采用RP-HPLC同时测定肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量。美国HP-1100高效液相色谱仪,GB11A四元泵,G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,D1315A二极管矩阵检测器,HI-HEM色谱工作站;UV-3000紫外分光光度计(Shimadazu,Japan);色谱柱:YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250mm,5μm;YMC Co,Ltd,Japan);流动相:CH3CN-MeOH-1%HAc(10:15:75);检测波长:334nm;流速:0.7mL/min;柱温:30℃。样品用流动相溶液超声提取。
张炬等测定不同寄主和不同产地肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷含量。Agilent 1100高效液相色谱仪,Agilent 1100化学工作站。色谱柱:美国SUPELCOSIL LC-18柱(250mm×4.6mm,5μm)。流动相A为乙腈-水-冰醋酸(13:86:1),用于测定松果菊苷;流动相B为甲醇-水-冰醋酸(32:67:1),用于测定麦角甾苷。流速1.0mL/min。检测波长335nm(松果菊苷)、334nm(麦角甾苷),柱温为40℃。药材用甲醇超声提取。
二、毛细管电泳法
蒋受军等用胶束毛细管电泳测定小野芝麻中毛蕊花糖苷的含量。以槲皮素为内标,采用美国Beckman P/ACE 5500型毛细管电泳仪,DAD检测器;MECC),未涂层弹性石英毛细管(75μm×56cm,有效长度50cm);压力进样,压力:138kPa,进样时间:10s;电压:15kV;柱温:25℃;检测波长:350nm;运行缓冲液:50mmol/L硼酸溶液-50mmol/L磷酸二氢钠溶液-20mmol/L脱氧胆酸钠溶液(1mol/L氢氧化钠溶液调pH=8。5);运行时间:35 min。样品溶液的制备:取本品2g,精密称定,置索氏提取器中,加氯仿-石油醚(30~60℃)(4:6)的混合液100mL,水浴中提取至溶液近无色,弃去溶液,残渣挥尽溶剂,加甲醇90mL,水浴中提取至溶液近无色,分取甲醇液,置100mL量瓶中,用适量甲醇洗涤容器,溶液并人量瓶中,并定容至刻度,摇匀,精密量取50mL,置三角瓶中,减压浓缩至干,用20mL水分数次溶解残渣,加于已处理好的聚酰胺柱(玻璃柱,直径1.5cm,聚酰胺2g,90~180目,水装柱)上。先用50mL水超声洗涤容器,加于柱上洗脱,弃去水液;再用10%乙醇溶液30mL超声洗涤容器,加于柱上洗脱,弃去洗脱液,再用50%乙醇溶液100mL超声洗涤容器,加于柱上洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至干,残渣加甲醇溶解并定容至5mL,摇匀,精密吸取1.0mL,置蒸发皿中蒸干,精密加入内标溶液4.0mL,超声使溶解,0.45μm的微孔滤膜滤过,即得。HPLC法与HPCE法测定毛蕊花糖苷含量的结果基本一致,HPCE法由于其高效快速的特点,改善了分离效果,较HPLC法缩短了分析时间(HPLC法需用时约60 min)。HPCE法可以作为一种有效手段来控制小野芝麻药材的内在质量。
三、薄层-紫外法
肉苁蓉中化学成分复杂,所以样品前处理比较麻烦。如:胡君萍等用薄层-紫外法测定肉苁蓉中松果菊苷的含量。HP 8453紫外-可见分光光度计(美国惠普);松果菊苷对照液在333nm处有最大吸收。方法:硅胶G板,氯仿-甲醇-水(6:4:0.5)为展开剂,上行展开,定位,刮下斑点。加甲醇定容至1Oml,振荡2min后过滤,弃去初滤液,取续滤液在333nm处测定吸收值(以无斑点处残留硅胶的甲醇溶液为空白)。供试品溶液制备:将3种肉苁蓉药材分别粉碎,精密称取药材粉末各2g,加甲醇2Oml,超声提取3次,每次3Omin,合并甲醇提取液,浓缩至干。残渣加1Oml水溶解后,加入2Oml大孔吸附树脂柱的顶端,以200ml水淋洗后,再用150ml甲醇洗脱,收集甲醇液并浓缩至5ml容量瓶中,摇匀,备用。