摘要：目的采用MEKC和HPLC法对黄芩多倍体进行了黄芩苷含量的测定，为大量样品的检测提供可靠的方法。方法对MEKC法和HPLC进行方法学考察的基础上，测定了黄芩中黄芩苷的含量，并进行数据的比较和相关性分析。结果两种方法的测定结果基本一致，其中采用HPLC法测定的结果偏高1%～3%，但两种方法测定的数据之间差异并无显著性，且相关系数较高 结论两种方法均可以应用于黄芩苷含量测定，但是MEKC法分析样品速度快、时间短、试剂费用低廉，如果仪器条件许可，MEKC法更适合于大量黄芩样品的测定。
关键词：黄芩；黄芩苷；毛细管电泳；高效液相色谱
黄芩是唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensisGeorgi的干燥根，在《神农本草经》中被列为中品。具有清热燥湿、泻火解毒、安胎止血的功效，常用于发热烦渴、肺热咳嗽、泻痢热淋、湿热黄疸、胎动不安、臃肿疮毒等症。黄芩也有腐肠、空肠、经芩、黄金茶、山茶根、烂心草等别名。主产于东北、河北和山西，以山西产量最大，河北承德为其道地产区。黄芩中种类最多、生物活性最显著的是黄酮类化合物。黄芩根中主要成分有黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、千层纸素A-葡萄糖苷等，茎叶中含有卵黄芩苷及黄芩苷等，其中黄芩苷药理活性最强，因此《中华人民共和国药典92000年版规定以HPLC法测定黄芩中黄芩苷的含量，且黄芩苷的含量不得低于9.0 。黄芩化学成分定性定量分析方法已经有较多的报道，定性分析主要有化学成分定性鉴别方法，定量分析主要有比色法、薄层色谱-紫外分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法。高效毛细管电泳法(MEKC)测定黄芩中的有效成分，目前属于较新的测定方法，国内报道较少。为此本实验将结合我们承担的国家中医药管理局重点课题——黄芩组织培养多倍体育种技术研究，同时采用MEKC和HPLC两种方法对我们获得的20个多倍体株系进行黄芩苷含量测定和筛选，同时进行方法技术学上的考察比较，以寻求高效、准确和简便的测定方法，并为黄芩多倍体优良株系的选育提供可靠的化学成分含量依据。
1 仪器和材料
Beckman Counter P／ACE MDQ Capillary Electrophoresis System；未涂层石英毛细管(河北永年光学纤维厂)。LC-1OAT 高效液相色谱仪(岛津)，LC-1OAT 泵，SPD-10A (UV-VIS)检测器，C-R6A 记录仪。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
实验样品为本教研室诱导培育得到的四倍体黄芩株系和二倍体黄芩，商品黄芩药材购于安徽毫州。
2 方法和结果
2．1 MEKC法测定黄芩苷含量
2．1．1 色谱条件：以25 mmol／L 硼砂缓冲液(pH8.3，其中含60mmol SDS)为电泳介质，未涂层石英毛细管(75μm×40.0cm，有效柱长33.0cm)为分离通道，压力进样(O.5psi，3s)，于25℃以下，以17kV恒压分离，272nm检测。
2．1．2 样品制备：精密称取样品0.200g，加入4OmL 7O%乙醇溶液，热回流提取2h，过滤，以少量溶剂洗涤残渣及器皿，定容为5OmL。稀释2O倍后以微孔滤膜过滤，取续滤液测定。
2．1．3 标准曲线的绘制：分别配制浓度为5，10，15，20，25，30，35μg／mL 的对照品溶液，各进样0.2μL，在优化条件下进行电泳分析，以黄芩苷峰面积为纵坐标，黄芩苷的浓度为横坐标绘制标准曲线。线性方程为Y=一2315+1233800X，r=0.9983，线性范围：5～35μg／mL。
2．1．4 精密度试验：分别精密吸取黄芩苷对照品溶液在上述条件下连续进样6次，结果黄芩苷峰面积的RSD为0.94%，表明仪器符合要求。
2．1．5 稳定性试验：精密吸取黄芩苷对照品溶液，每隔2h进样分析，连续测定6次，结果黄芩苷峰面积的RSD为2.2 ，表明样品中黄芩苷至少在12h内稳定，可以准确地进行定量分析。
2．1．6 回收率试验：精密吸取黄芩对照品溶液加入样品中，其余操作同2．1．2，重复6次。结果平均回
收率为101.5%，RSD 为0.83。
2．2 HPLC法测定黄芩苷含量
2．2．1 色谱条件：色谱柱：Lichrospher C18(5μm，4.6mm×250mm)；检测波长：275nm；灵敏度：0.05；流动相：水-甲醇-磷酸(45：55：0.2)；流速：0.8 mL／min；进样量：2OμL。
2．2．2 样品制备：精密称取样品0.4000g，加入2OmL 7O%乙醇，热回流提取2h，过滤，以少量溶剂洗涤残渣和器皿，定容至5OmL。用色谱纯甲醇稀释1O倍，以微孔滤膜过滤，取续滤液进样。
2．2．3 标准曲线的绘制：分别配制浓度为5.0，7.5，10.0，12.5，15.0μg／mL 的对照品溶液，各进样2OμL。以黄芩苷峰面积为纵坐标，黄芩苷浓度为横坐标作标准曲线。其线性方程为Y=一295+1649.6X，r=0.9972，线性范围：5.0～ 15.0μg／mL。
2．3 两种方法的测定结果比较
2．3．1 图谱比较：：黄芩苷在HPLC和MEKC仪器分析的图谱。
2．3．2 含量比较：采用MEKC和HPLC法对研究获得的2O个多倍体株系和对照二倍体黄芩及商品药材进行黄芩苷的含量测定，(所有样品均为两年生黄芩)。
测量结果表明：供试的22个样品中，采用MEKC法测定的黄芩苷含量为1O.62%～17.3O%平均值为14.O5%，而采用HPLC法测定的黄芩苷含量为12.31%～17.63%，平均值为15.35%。
进一步对采用HPLC法测定的黄芩苷含量和采用MEKC法测定的相应数据进行相关性分析，结果表明，两组数据相关性良好，相关系数r=0.8221。由F检验知，两种方法间的差异无显著性。
3 讨论
3．1 MEKC 法具有操作简单、柱效高、进样体积小、分析时间短、试剂成本低、易于清洗、分离模式多，容易建立新的分析方法等优点。由于MEKC法与HPLC 法的一致性较好，且MEKC法分析时间短、成本低，故MEKC法适宜应用于样品数目多的分析测定，在大量株系选育中使用具有较高的可信度，可以在大量筛选样品中应用。
3．2 HPLC法是目前较多应用的一种测定方法，从本实验结果看，其分析准确性也比较好。本实验中HPLC法测定的黄芩苷含量普遍比MEKC 法测定结果高1%～3%，属于正常误差范围，因此HPLC法同样不失为方便、准确和可靠的分析测定方法。
3．3 黄芩以根人药，因此根部农艺性状和根部有效成分的含量成为选育多倍体优良品种的重要标准。据我们的田间实验结果表明：两年生黄芩多倍体的主根长度、茎粗均明显高于二倍体。大部分多倍体株系的根鲜重、干重达到二倍体的2倍，因此采用同源多倍体育种可以明显提高根部的产量性状。而本实验对黄芩根部中黄芩苷含量进行了两种方法的同步测定。结果表明：大部分多倍体株系的根中黄芩苷含量高于对照株系，更明显高于商品药材。这一结果展示了选育高产优质的黄芩优良品种的良好前景。