母丁香为桃金娘科植物丁香Eugenia caruopyllata Thunb. 的近成熟果实。2005版《中国药典》新增其含量测定方法为高效液相色谱法,以丁香酚为指标成分。
现阶段对母丁香及其制剂的含量测定方法报道极少,但对丁香酚的含量测定方法报道较多。现介绍其含量测定方法。
文献报道的丁香酚的含量测定方法主要有HPLC和GC。
⑴ HPLC法
2005版《中国药典》母丁香含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(65:40)为流动相;检测波长为280nm。理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过二号筛)约0.3g,精密称定,置20ml量瓶中,加无水乙醇至刻度浸泡24小时,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
文献报道的HPLC法所采用的条件基本上都为药典规定的。如:赵淼等用HPLC法测定丁桂散中丁香酚含量。BIO-RAD公司(美国)高效液相色谱仪:含2800液栩色谱泵、7215型手动进样器、紫外光检测器;泰乐公司(北京)TL 9900色谱数据工作站。流动相:甲醇-10%甲醇(44:56),流速0.7ml/min,检测波长280nm。回归方程:Y =3.068E+O.7X-1.763E+0.6,r=O.9999,线性范围O.5347μg~4.278μg。
宋娅莉等用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定了藏药松石丸中丁香酚的含量。Waters 600E高效液相色谱仪;Waters 486紫外检测器;746数据处理系统。色谱柱为Waters Symmetry C18柱(3.9×150mm,5μm);流动相为甲醇-水(50:50),检测波长215nm,流速为lmL/min。线性范围为0.04~0.16μg,r=0.9998;平均回收率为98.9%,RSD=1.48%(n=5)。
⑵ GC法
采用GC法测定丁香酚的含量,常用的内标物为桂皮醛、麝香草酚、环己酮、水杨酸甲酯、联苯、正十七烷、正二十二烷等。如:
林生文等采用气相色谱法测定丁蔻理中丸中丁香酚的含量。以聚乙二醇(PEG)-20M为固定相,涂布浓度为1O%,柱长2m,内径4mm;柱温l8O℃;载气:N2:进样器220℃,FID检测器;柱头压力:150kPa,内标物:桂皮醛。所测丁香酚与其它组分具有良好的分高效果,线性范围为8.92~71.36μg/ml,平均回收率为99.9%,RSD为1.28%(n=5)。
万丽等用超临界流体萃取样品,毛细管气相色谱法测定丁香药材中丁香酚的含量。DM 100注射泵、SFX 2-10萃取器(美国ISCO公司),气相色谱仪HP-5890 Series Ⅱ,FID检测器,25m×0.32 mm×0.52μm,HP-5柱(crosslinked 5 Ph Me Silicone),HP-3365化学工作站,均为美国Hewlett-Packard公司产品。气化温度250℃,检测器温度270℃,柱温160℃,载气N2,柱头压55kPa,分流比100:1,内标为麝香草酚。回归方程:y=2.153 X+1.526×10-4 ,r=0.999 9,线性范围48.7~584.4ng。
田薇等采用毛细管气相色谱法测定八味檀香丸中丁香酚的含量。岛津GC-17A气相色谱仪;:以环己酮为内标物。SE-54石英毛细管柱(0.25mm×25m×0.25μm);检测器FID;柱升温程序:初始温度170℃,保持3min,以2℃/min升至180℃,保持5min;载气高纯氮(纯度>99.9999%);柱前压50Kpa;采用分流进样;分馏比50:1;进样量2μL;理论塔板数以丁香酚峰计不低于50000。
⑶薄层扫描法
赵仁庚等应用双披长薄层扫描法测定了丁香半夏丸中的丁香酚。岛津CS-930双波长薄层扫描仪。硅胶G板,以醋酸乙酯-石油醚(1:9)为展开剂, 上行展开,展距17cm,5%香草醛硫酸液喷雾, 于105℃烘5~lOmin显色(丁香酚斑点显黄褐色)。扫描条件:双波长λS=446nm,λR=670nm,狭缝:1.2×1.2mm。扫描方式:反射法锯齿扫描。丁香酚在l~4μL范围内线性关系良好,回归方程为:Y=150623.9X-1242.6。
成源等用双波长薄层扫描法测定丁香中丁香酚的含量。CS-930型双波长薄层扫描仪,日本岛津公司。以氯仿-甲醇-水(6:3:1)下层为展开剂,在254nm紫外灯下观察硅胶GF254层析板,样品色谱中,在与对照品色谱相应位置上显相同暗斑。反射法双波长锯齿扫描,λS==296nm,λR =370nm,狭缝1.25mm×1.25mm,线性化系数SX=5,漂移线0.02。回归方程为Y=6226.3X+1055.5,r=0.99983(n=6)。
⑷其它
张以勤用紫外分光光度法测定乐乐霜中丁香酚含量。岛津UⅣ-2201型紫外分光光度计。检测波长为81.6nm。回归方程A=0.0086+0.7290C,r=0.9999。