羚羊角塞药材成分的分离研究

摘要 目的：研究羚羊角塞药材成分的分离。方法：用凝胶色谱法．透析法和乙醇沉淀法对羚羊角塞水提液中蛋白质、氨基酸等进行分离。结果：羚羊角塞水提液主要可分离成大分子蛋白质和小分子肽、氨基酸成分。结论：通过药理实验验证用透析法分离的太分子蛋白质有较强的镇痛、镇惊作用，而小分子部分只有较强的镇惊作用。
关键词 羚羊角塞；成分分离；凝胶色谱法
目前发现羚羊角塞与羚羊角有相似的化学成分，因羚羊角主要依赖进口．且价格昂贵，故应用受到限制。羚羊角塞为羚羊角整体一部分，约占整角的40%，且羚羊角附生于角塞，其精血濡养需通过角塞的输送而达及。故设想，角塞可能有或部分有与羚羊角相同的药效成分。
本实验通过羚羊角塞的成分分离，选择镇痛、镇惊为指标，对角塞的有效成分进行了研究。
1 实验材料和仪器
1．1 材料
从湖南省中医学院附一医院购得的羚羊角塞，经鉴定为牛科动物赛加羚羊Saiga tatarica角的角塞部分。羚羊角塞的粉碎用锯把羚羊角塞切成小方块，用7O%乙醇在85℃～95℃酥羚羊角塞至软，置食物料理机中粉碎过4O目筛备用。
1．2 仪器
BS-100A 自动部分收集器；HL-1恒流泵；75IG分光光度计；硬质玻璃色谱柱(Φ2.5cm×50cm)；透析袋(分子量≤2O，000)
1．3 试剂
氯化钠(A ·R)sephadex G-50(进口分装)上海试剂厂。
2 实验方法及结果
2 .1 样品制各精密称取50g羚羊角塞粉，加蒸馏水煎煮三次(20倍水1h、10倍水1h、10倍水1h)过滤，合并滤
液，微火浓缩至含生药0.3g／ml(下称水提液)。
2．2 水提液的成分分离 ．
取水提液1Oml上sephadex G-5O柱，用新煮沸的冷蒸馏水配制的0．1 mol／L Nacl溶液洗脱，用自动部分集器分步收集洗脱液。流速为6min一管，约6ml／管，各管洗脱液用751G分光光度计在260nm处测定吸光度(A)。
2．3 水提液的膜分离及纯化
取水提液9Oml装入透析袋中，用蒸馏水透析四次(每次300ml水，12h)。结果透析外液透明，透析内液混浊。合并透析外液。内、外液分别浓缩至含生药0.9g/mg备用。取透析内、外液浓缩液、牛血清蛋白、酷氨酸各约5 m1分别加至sephadex G-50柱中，按上述方法分离。
2．4 图28-3l管馏分的分离
把28-3l管馏分分成两部分，一部分放人冰箱后进行sephadexG-50分离，一部分直接进行sephadexG-50分离。
2．4 水提液的乙醇沉淀法分离及纯化
取水提液8Oml，加无水乙醇147ml沉淀大分子蛋白质，离心，将上清液倒出。然后蒸馏至7Om1．再浓缩至含生药1.2g／ml备用，取该浓缩液5.5 ml，按上述方法分离。
3 小结与讨论
3．1 比较两图，表明透析内液的大分子成分(分子量2万以上)中，其分子量和牛血清蛋白分子量相当的占一定数量，同时也含有分子量较小的许多肽类，有的甚至小于2万，说明透析效果还不很理想。但透析内液中的部分小分肽可能是由于大分子蛋白质的解离所致有待进一步研究。
3．2 表明透析外液的小分子成分(分子量2万以下)含有小分子肽和氨基酸，而氨基酸成分含量可能更大。
3．3 在药理实验中，用扭体法做的镇痛实验中大分子蛋白质组(透析内液)P<0.01，小分子肽和氨基酸组(透析外液)P3．4 图可看出，乙醇沉淀法可几乎把大分子部分和小分子部分分开。通过药理实验表明，对镇痛、镇惊都无效，如乙醇对氨基酸无影响，而乙醇可能使蛋白质、肤的结构都发生改变。由此可预测羚羊角塞对镇痛、镇惊起作用的成分是蛋白质和肤。
参考文献
1 张保国．李钛，刘东．羚羊角与羚羊角塞的化学成分比较．中药材．1993；l6(1O)：30
2 王爱芳等羚羊角与其角塞的解热、镇痛、镇静作用．中药材．1993；15（9）：31
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