大黄酸含量测定方法一览

大黄中含有多种游离蒽醌及其苷类，大黄酸为主要有效成分之一，因此，一般大黄及其制剂多选择测定大黄酸的含量作为质量控制的指标。大黄酸的分析方法主要有薄层扫描法、荧光分析法、高效液相法等，现就大黄酸的测定方法做一总结。
薄层扫描法
方法1：仪器：CS-900双波长薄层扫描仪(日本岛津)；SPC-100紫外检测器。以苯-甲酸乙酯-甲酸-甲醇-水(30：10：0.5：2：5)的上层液为展开剂，检测波长为430nm。
方法2：仪器：岛津CS一9000薄层扫描仪；929型薄层制板器(重庆贝可得公司)；微量点样毛细管。自制含0.5%羧甲基纤维素钠硅胶G薄层板；展开剂：环己烷-醋酸乙酯-甲酸(15：5：0.5)；层析温度：2O～ 30℃ ，湿度：<50%；测定波长为430nm，参比波长为550nm。
方法3：仪器：日本岛津CS一930型双波长薄层扫描仪。展开条件：甲苯-二氯甲烷-冰醋酸(6：3：1)，测定波长为440nm，参比波长为550nm，Sx=3。
方法4：仪器：CS-930薄层扫描仪(日本岛津) ，以正己烷-醋酸乙酯-甲酸(30：10：0.5)为展开剂；测定波长为435nm，参比波长为600nm，Sx=3。
样品的前处理上根据大黄酸以及制剂的性质具体考虑，一般多用不同浓度的盐酸或硫酸水解不同时间，再用氯仿萃取。
HPLC法
方法1：仪器：Waters液相色谱仪，M411紫外检测器，M510输液泵，C-R6A数据处理机，U-6K手动进样器。色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，10μm(4.6×250mm)；流动相：甲醇-水-醋酸(83：17：0.2)；流速：1.0mL／min；检测波长：254nm。
方法2：岛津LC-10ATHPLC泵；Shim-pack ODS柱(150mm×4.6mm)；C-R7AC数据处理仪；SPD-IOA紫外可见检测器(以上均为日本生产)；l0μL LNEVADA微量进样器(美国生产)，10％甲醇乙腈-0.2％磷酸溶液(46：54)为流动相，流速lmL／min，检测波长258nm，柱温40℃。
方法3：日本岛津4C-4A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外可见检测器，C-RJA数据处理器。流动相：甲醇-0.1mol/L磷酸水溶液（95：15），流速：1.0ml/min检测波长254nm。
方法4：仪器：大连依利特高效液相色谱仪；P200 II高压恒流泵；UV200 II紫外可变波长检测器；色谱柱：HYDERSIR BDS C18分析柱(5μm，200nm × 4.6nm)；柱温：室温；流动相：甲醇-水-异丙醇(80：10：10)磷酸调PH值为3.0。流速：0.6ml／min：检测波长：439nm：
样品的前处理上根据大黄酸以及制剂的性质具体考虑，一般多用两种方法：甲醇或氯仿超声或索氏提取或提它提取方法提取，过滤或离心操作，取清夜进样；用不同浓度的盐酸或硫酸水解不同时间，再用氯仿萃取，取清夜进样。
极谱法
方法1：仪器：JP3-l型极谱仪(山东电讯七厂)，XJP-821(B)型新极谱仪(中科院长春应化所，江苏电分析仪器厂)；DME为工作电极，参比电极为饱和甘汞电极，辅助电极为铂丝。以H3B03-Na2B407(PH=9.O0)为底液。起始电位为-0．40V
方法2：JP303线性扫描极谱仪(成都仪器厂)，滴汞、饱和甘汞、铂丝三电极体系。以pH=4．74的0.2molNaAC-HAC为底液。起扫电位为-100 mV。
毛细管电泳电化学方法(CE—ED)
方法：仪器：毛细管电泳双通道电化学柱端检测装置：高压电源( PN10／MCN22，美国High Voltage Elec-tronies Corporation)；DF-86A伏安仪(登峰电子仪器厂，氧化在正区，还原在负区)；多通道毛细管电泳数据工作站(中山大学电分析室)；CHI600A电化学工作站(上海辰华仪器公司)；石英毛细管柱(25∽150／μm i．d．)(河北永年光导纤维厂)；碳糊电极(自制，采用150／μm i．d．的毛细管作为外套管，内填充质量比为60：40的光谱纯炭粉和石蜡油混合物)，金属圆盘工作电极(自制，采用150／μm i．d．的毛细管作为外套管，内穿人100／μm i．d．的铂丝或金丝)，饱和甘汞电极(SCE)(江苏电分析仪器厂)，铂片辅助电极(上海电光器件厂)。
近年来，薄层扫描法和高效液相色谱法测定大黄酸的含量报道较多，极谱法和毛细管电泳电化学法报道较少，但相比之下，极谱法和毛细管电泳电化学法可以获得更多的样品信息，而且扩大了大黄及其制剂的质控方法。