从本质上说,药物都是化学物质,其检测方法均为临床化学的常用技术。但体液中的药物大多以μg/ml或ng/ml水平存在,并且其检测不仅受同时存在的多种结构相似的内源性物质干扰,还受和原型药仅有微小差别的代谢物干扰。而某些药物的TDM除原型药外,还需同时检测具药理活性的代谢物。另一方面,药物的有效浓度范围和中毒水平,是结合大量临床观察确定的,要求任何实验室建立的测定方法应具有高度可比性。下面将仅结合药物测定的特殊要求,对常用临床化学技术作一评估性介绍。
(一)光谱法
多数药物或代谢物本身在紫外光区即存在吸收峰,一些药物或代谢物受激发后,本身即可发射荧光;而另外一些药物还可通过特异的显色反应用分光法检测。但无论可见光分光光度法、紫外光度法还是荧光光度法,用于体液中药物检测时,都存在灵敏度低、特异性差的缺点,特别是易受代谢物干扰。虽然采用提取、双波长、示差、导数分光光度法等试图提高其灵敏度和特异性,仍未能从根本上克服上述缺点。但光谱法操作简便,所需仪器一般临床实验室都具备,检测成本低,便于推广。对治疗超级资料>理论书籍>中医学>中医基础理论>气、血、津液>血 onclick=WinOpen(\"/index/0A/10/70/a1/03/03/Index.htm\") >血药浓度水平较高,经适当方法改良光谱法能满足临床需要的药物,现阶段仍不失为一可采用的方法,如超级资料>药物手册>西药大全>自身活性物质药理>解热镇痛抗炎药及抗痛风药>阿司匹林 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/33/12/43/Index.htm\") >阿司匹林、超级资料>药物手册>西药大全>自身活性物质药理>解热镇痛抗炎药及抗痛风药>对乙酰氨基酚 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/33/12/44/Index.htm\") >对乙酰氨基酚、超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>呼级系统药>平喘药>氨茶碱 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/45/37/71/Index.htm\") >氨茶碱、超级资料>药物手册>西药大全>中枢神经系统药>抗癫痫药及抗惊厥药>苯妥英钠(大仑丁) onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/35/15/80/Index.htm\") >苯妥英钠、超级资料>药物手册>西药大全>中枢神经系统药>镇静催眠药>苯巴比妥 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/35/14/63/Index.htm\") >苯巴比妥钠等。
超级资料>理论书籍>中医学>中医基础理论>病因>六淫>火(热) onclick=WinOpen(\"/index/0A/10/70/a1/04/02/08/Index.htm\") >火焰发射光谱法和原子吸收光谱法特异性及灵敏度均高,操作也较简便,但仅能用于某些含体内仅微量存在的金属离子药物。在TDM中可供锂盐、铂盐检测用。
(二)色谱法
又称层析法。系通过层析作用,使样品中理化性质不同的组分得以分离,若再配以适当的检测器,则可同时完成定性、定量工作。特异性高,可同时检测同一样本中的不同组分,是色谱法的共同优点,这在TDM中尤有意义。薄层色谱法(TLC)虽然不断改进定量点样技术并使用扫描定量,但其灵敏度及重复性仍低于其他色谱法,除用于毒物的检测外,在TDM工作中较少应用。
自60年代末期相继发展成熟的超级资料>理论书籍>中医学>中医基础理论>气、血、津液>气 onclick=WinOpen(\"/index/0A/10/70/a1/03/02/Index.htm\") >气相色谱法(GC)和高效液相色谱法(HPLC),由于实现了高效层析分离和检测联机,可用微生活保健>家庭健康>电脑保健 onclick=WinOpen(\"/index/0D/01/q8/Index.htm\") >电脑控制层析条件、程序和数据处理,其特异性、灵敏度和重复性均好,并可一次同时完成同一样本中多种药物及其代谢物检测。若采用内标本法定量,还可排除部分操作误差,提高检测结果的可靠性。HPLC和GC相比,由于不需对样品高温气化,一般都可不进行衍生化处理;另一方面,HPLC的固定相种类较多,流动相通过改变其组成成分及比例更是千变万化。二者适当组合,可对绝大多数有机化合物药进行分离测定。事实上,正是GC和HPLC这类先进可靠的检测方法的应用,促进了TDM的形成和发展。特别是HPLC已成为TDM的重要检测技术,并常用作评估其他方法的参考方法。当然,GC和HPLC一般均要求对样品进行预处理,两法所用仪器都昂贵尚难普及。但从发展的观点看,HPLC仍将成为国内TDM的主要分析方法。近年来发展的GC-质谱、HPLC-质谱联机检测,更使这类分析手段的性能极大提高。
(三)免疫化学法
不少药物都是半抗原或抗原,所以可引起过敏反应。若能制备这些药物相应的特异性抗体,即可根据抗原-抗体反应的特异性,应用免疫化学法检测这些药物。TDM应用的免疫化学法一般都采用竞争性免疫分析,即通过定量加入的少量特异性抗体,与标本中相应的抗原或半抗原生活保健>两性时空>性保健品 onclick=WinOpen(\"/index/0D/06/80/Index.htm\") >性药物及定量加入的标记药物间,产生竞争性结合,检测标记药物与抗体结合的抑制程度,和同样处理的标准管比较,便可对样本中的药物定量。免疫化学法灵敏度极高,大多可达ng甚至pg检测水平,可满足所有药物TDM的要求;该法所需标本量少,一般均不需预处理,操作简便,并可制成商品化试剂盒;还可利用一般生化、荧光自动分析仪进行自动化操作。这些都是免疫化学法的优点。
但在TDM中免疫法存在的主要问题是,特异性易受干扰。干扰因素除来自内源性物质外,特殊的是抗原性决定基团未发生变化的待测药物的代谢,或具相同相似抗原性的其他药物及代谢物。如超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>强心药 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/22/Index.htm\") >强心药超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>强心药>地高辛(狄戈辛) onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/22/44/Index.htm\") >地高辛、洋超级资料>药物手册>中草药>中药大典>根类>地黄 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/01/01/31/41/Index.htm\") >地黄毒甙、超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>强心药>地高辛(狄戈辛) onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/22/44/Index.htm\") >地高辛代谢物二氢超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>强心药>地高辛(狄戈辛) onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/22/44/Index.htm\") >地高辛,均可与超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>强心药>地高辛(狄戈辛) onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/22/44/Index.htm\") >地高辛抗体结合。显然,在体内几乎不发生代谢转化而原型排泄的药物,则较少代谢物干扰,尤其适用于免疫法检测,如庆大霉素等氨基甙类药品信息>药物安全>抗生素专题 onclick=WinOpen(\"/index/0C/04/60/Index.htm\") >抗生素。当然,只有具备完全或半抗原性的药物,并要能制备特异性抗体,才能用免疫化学法进行TDM。但总的来说,由于免疫化学法的前述优点,仍是TDM检测技术发展的主要方向。
免疫化学法根据标记物性质不同,可分做放射免疫法、荧光免疫法和酶免疫法三类。根据测定中是否要分离与抗体结合和未结合的标记物,又可分为多相(需分离)和均相(不分离)免疫分析法两种。放射免疫法虽存在生活保健>家庭健康>预防保健>生活环境>公害病与污染物>放射性污染 onclick=WinOpen(\"/index/0D/01/30/60/20/70/Index.htm\") >放射性污染,又是多相体系,分离结合和未结合标记物操作繁杂,影响因素多,而分离效果又直接影响测定结果,但其灵敏度高,标记技术相对成熟,国内生产的TDM试剂盒多为此类。荧光免疫法按反应体系及定量方法不同,还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比,荧光免疫法无生活保健>家庭健康>预防保健>生活环境>公害病与污染物>放射性污染 onclick=WinOpen(\"/index/0D/01/30/60/20/70/Index.htm\") >放射性污染,并且大多操作简便,便于推广。国外生产的TDM用试剂盒,有相当一部分即属于此类,并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。酶免疫分析法是目前国外TDM免疫分析中最常采用的方法,特别是均相酶免疫分析法。本法除具有荧光免疫法的优点外,通过选用合适的标记酶,在目前已较广泛普及的多种自动化分析仪即可实现自动化操作,更利于推广。特别是近年来,在TDM的酶免疫分析中,应用酶偶联反应原理,以辅酶黄素腺嘌呤二超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>血液系统药>促进白细胞增多药>核苷酸 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/37/39/47/Index.htm\") >核苷酸(FAD)标记药物,将超级资料>药物手册>西药大全>内脏系统药>调节电解质平衡药>葡萄糖 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/37/47/48/Index.htm\") >葡萄糖氧化酶蛋白、偶联辅助酶-过氧化物酶及底物和显色剂4-氯-1-萘超级资料>理论书籍>预防医学与公共卫生>环境医学>环境、公害病、污染物与健康>酚 onclick=WinOpen(\"/index/0A/10/30/32/48/53/Index.htm\") >酚固化在薄膜上,制成类似pH试纸样的试条。测定时,只要滴上微量样品,根据成色深浅,即可作出药物浓度的粗略判别。这一方法使病人自我或临床医师病床旁方便快速进行TDM工作成为可能。目前国外已有供茶碱和超级资料>药物手册>西药大全>中枢神经系统药>抗癫痫药及抗惊厥药>苯妥英钠(大仑丁) onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/35/15/80/Index.htm\") >苯妥英钠测定用的这种试条问市。无疑这一方法的推广,将有助于促进TDM的普及,具有良好的发展前景。
(四)其他检测方法
抑菌试验曾用于测定体液中的超级资料>药物手册>西药大全>抗菌药 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/41/Index.htm\") >抗菌药物浓度。该方法简便易行,可利用临床细菌室即可开展。但其特异性、灵敏度、重复性均差,定量粗糙,并易受同时使用的其他超级资料>药物手册>西药大全>抗菌药 onclick=WinOpen(\"/index/0A/30/b1/41/Index.htm\") >抗菌药物的干扰,在TDM中已较少使用。一些本身即为内源性物质的药物,如钾、钠、钙、激素药等,在临床检验中已有成熟的检测方法,则可借用。
必须指出,多数需进行TDM的药物,都有不只一种方法可供选用。应根据测定药物的有效超级资料>理论书籍>中医学>中医基础理论>气、血、津液>血 onclick=WinOpen(\"/index/0A/10/70/a1/03/03/Index.htm\") >血药浓度水平所决定的灵敏度要求,是否需同时检测多种药物或活性代谢物,可供选用的仪器设备及检测经济成本等,综合考虑,确定一能满足临床要求的可行方法。