本实验采用高效液相色谱蒸发光散射检测器，测定了黄芪及其制剂中黄芪甲苷的含量。黄芪甲苷的含量测定可采用薄层扫描法［1］，但操作繁琐，重现性差。本文实验结果表明该方法灵敏度、稳定性和重现性均能满足要求，是一种检测黄芪以及含有黄芪的制剂中黄芪甲苷成分的有效分析方法［2，3］。
1 仪器与试剂
岛津LC-10AS型输液泵；法国SEDEX 55型蒸发激光散射检测器(ELSD)；美国HP3395型积分仪；甲醇为优级纯；黄芪甲苷对照品(纯度为99%以上)，由中国药品生物制品检定所提供。黄芪药材购于北京市药材公司(产于内蒙)，贞芪扶正冲剂样品为吉林省通化百山制药厂出品，批号为950722。
2 色谱及检测条件
色谱柱：美国Phenomenex公司Luna C18(2)，(5 μm,150 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-水(75∶25)；流速：1 mL.min-1；进样量：10 μL；ELSD检测器漂移管温度：40 ℃，载气(空气)流速：202.7 kPa。
3 溶液的制备
3.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成2 mg.mL-1的溶液，即得。
3.2 黄芪药材供试品溶液的制备 精密称取黄芪药材粉末约2 g，加2%氢氧化钾的甲醇溶液30 mL，回流提取3次，每次1 h，合并提取液置水浴上蒸干，残渣加水30 mL溶解，移置分液漏斗中，加氯仿-正丁醇(2∶1)提取4次。每次30 mL，合并提取液，提取液蒸干，残渣用甲醇转移至5 mL量瓶中，即得。
3.3 贞芪扶正冲剂供试品溶液的制备 精密称取本品5 g，加水50 mL溶解、滤过，滤液置分液漏斗中，用氯仿-正丁醇(2∶1)提取4次，第1次50 mL，以后每次30 mL，合并提取液，蒸干，残渣加2%氢氧化钾的甲醇溶液20 mL，水浴回流1 h，提取液蒸干，残渣加水20 mL溶解，移至分液漏斗中，用氯仿-正丁醇(2∶1)提取4次，每次20 mL，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇转移至5 mL量瓶中，即得。
4 线性范围
分别精密吸取上述对照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0，25.0 μL，注入液相色谱仪中，以峰面积的自然对数为横坐标，以浓度的自然对数为纵坐标，线性回归，线性范围为1.0～5.0 mg，其回归方程为：
Y=0.731X-4.135 r=0.999 6
5 回收试验
精密称取已知含量的黄芪药材粉末约1 g，贞芪扶正冲剂约2.5 g，分别定量加入黄芪甲苷对照品0.5 g和1 g，按“3”项下方法制备溶液，按“7”项下方法测定、计算，求得黄芪药材及贞芪扶正冲剂中黄芪甲苷的平均回收率(n=5)分别为98.84%(RSD为0.87%)和98.03%(RSD为1.4%)。
6 稳定性试验
取黄芪药材供试品溶液，在放置4，6，8，12，24，48 h后，进行稳定性试验，测定结果表明在48 h之内黄芪甲苷色谱峰面积无明显改变。
7 样品测定
分别精密吸取对照品溶液及药材和冲剂的供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，将峰面积及浓度均取自然对数后用外标法计算，求出供试品浓度的自然对数，再转换成供试品的含量即得。样品测定结果(n=3)：来自内蒙的2种黄芪药材中黄芪甲苷含量分别为0.165%和0.049%；市售的黄芪药材中黄芪甲苷含量为0.097%；批号950722的贞芪扶正冲剂中黄芪甲苷含量0.099 mg.g-1。对照品及供试品色谱图见图1。
图1 HPLC色谱图
A.对照品 B.药材供试品
1.杂质 2.黄芪甲苷
8 空白实验
按处方自配不含黄芪的贞芪扶正冲剂，按“3.3”项下方法制备空白溶液。注入液相色谱仪中，结果空白溶液无干扰。
9 讨论
文中供试品溶液制备，采用2%氢氧化钾的甲醇溶液回流处理，是将黄芪醇类皂苷酯解为黄芪甲苷。
采用ELSD测定黄芪甲苷含量时，其峰面积值与对照品浓度的线性关系不太理想，而将峰面积与对照品浓度值分别取自然对数后可得到理想的线性关系，这种现象与ELSD检测器的检测机理是一致的［4，5］。
黄芪甲苷成分的紫外末端吸收较差(λmax=200.8 nm)，如用紫外检测，受试剂影响很大，使分析很难进行。目前文献报道［1］以及中国药典(1995年版)均采用薄层扫描法进行定量，而薄层扫描法的稳定性和重现性相对较差，且操作繁琐。ELSD检测器为质量型检测器，不受外部环境干扰，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰检测，灵敏度、稳定性及重现性亦能符合含量测定的要求，且操作简便，是一种检测黄芪甲苷成分的新型有效的分析方法。