固相萃取结合HPLC法快速测定紫杉醇的含量

　　1.1　仪器与试剂：Beckman公司FL-750 HPLC仪。甲醇、乙腈为优级纯，水为重蒸水。紫杉醇对照品购自Sigma公司，纯度＞98.7%。红豆杉浸膏由云南张峰植物加工厂提供，紫杉醇含量小于1.0%。东北红豆杉培养细胞系本实验室提供。Sep-Pak C18柱(1000 mg/6 mL)购自大连化学物理所；γ-Al2O3(层析用，200～300目)是上海新诚精细化学品有限公司产品。
1.2　固相萃取(SPE)：Al2O3固定相柱(1000 mg/6 mL)是采用血清级聚丙烯柱管，装填γ-Al2O3自制而成。C18 SPE的操作步骤：往柱中依次加入10 mL乙酸乙酯、甲醇和0.01 mol/L(pH5.0)的乙酸铵水溶液并抽干，最后将液面维持在胶层上1～2 mm高度。将红豆杉浸膏溶解于40%～60%的甲醇-乙酸铵水溶液中。取0.5 mL加到柱中，抽干。分别用20%、60%、75%的甲醇-乙酸铵水溶液(0.01 mol/L)各10 mL过柱。紫杉醇富集在75%的洗脱液中。Al2O3 SPE的操作步骤：依次用甲醇和氯仿各10 mL活化柱，然后将溶于氯仿中的红豆杉浸膏溶液0.5 mL加到柱中，抽干。再分别用100%、98%、95%的氯仿-甲醇各10 mL过柱。紫杉醇集中在95%的氯仿溶液中。萃取过程中流动相速度稳定控制在5～8 mL/min。将含紫杉醇的洗脱部分蒸干，残渣用甲醇溶解定容，经0.5 μm滤膜过滤，清液作HPLC分析。
1.3　HPLC色谱条件：C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，Beckman);流动相：甲醇-乙腈-水(25∶35∶40及25∶45∶30)；流速：1.4 mL/min，等梯度洗脱；检测：UV227 nm；室温。
1.4　标准溶液配制：精确称取紫杉醇标准品5.0 mg，用甲醇溶解于5 mL的容量瓶中并定容，摇匀待用。