1 大孔吸附树脂的预处理及再生
1.1 预处理:取市售大孔吸附树脂,用乙醇加热回流洗脱(或用改良索氏提取器加热洗脱),洗至洗脱液蒸干后无残留物。经乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。
1.2 装柱:以乙醇湿法装柱,继续用乙醇在柱上流动清洗,不时检查流出的乙醇,至与水混合不呈白色混浊为止(取1 mL乙醇液加5 mL水)。然后以大量的蒸馏水洗去乙醇,备用。少量乙醇存在将会大大降低树脂的吸附力。
1.3 再生:将样品溶于少量水中加至柱的上端,也可以将样品先溶于少量乙醇中,拌入适量树脂,挥去乙醇后,再将拌有样品的树脂加到柱上。先用水,继而以乙醇-水洗脱,逐步加大醇的浓度,同时配合高效液相色谱法作指导。一般用95%的乙醇洗脱至无色时,树脂柱即已再生,然后以大量水洗去醇,即可进行下一次的提取分离。经反复使用后,吸附树脂颜色变深,吸附效果下降时,可用0.01%~1 mol/L NaOH(或HCl)洗涤或浸泡适当时间,至树脂接近原颜色为宜,继用蒸馏水洗至中性即可再用。如果柱上方沉积有悬浮物,影响流速,可用水从柱上进行反洗,以便把悬浮物顶出。经多次使用后,有时柱床挤压过紧,或树脂颗粒部分破碎而影响流速,可从柱中取出树脂,盛于一个较大容器中用水漂洗除去小颗粒和悬浮杂质,再重新装柱。大孔吸附树脂应湿态保存,若部分颗粒暴露在空气中失水,在进行水溶性杂质分离时,失水后被空气填充的颗粒会浮于水面,此时将上浮树脂用乙醇处理,将树脂内部的空气排出后使用。
2 川芎总提取物的分离
取川芎饮片,略破碎,用95%乙醇回流提取9次,每次1.5 h,溶媒用量为8~10倍,提取液过滤,合并滤液,减压浓缩至干,再加适量水加热使溶解,抽滤,滤液加到已处理好的大孔吸附树脂柱(干膏和树脂的比例为1∶15~20,或药材和树脂的比例为1∶2~3)上,慢慢滴加完后,先用水洗至还原糖反应呈阴性(Molish反应),改用30%乙醇洗至阿魏酸和川芎嗪全部洗脱完全(Rp-HPLC法检测,检测液中无阿魏酸和川芎嗪的色谱峰),合并30%乙醇洗脱液,减压回收乙醇至干,低温真空干燥,呈淡黄色粉末,即为川芎总提取物(含川芎生物碱类和酚类化合物),其中川芎嗪和阿魏酸二者约占本品的25%~29%,收率为0.6%。
分享到: