摘 要：选择不同养殖模式的养鸡场，对禽流感实施程序化免疫，开展鸡母源抗体及免疫后抗体消长规律的测定，保护性抗体滴度研究，禽流感发生和流行病学调查等。结果表明，种禽场禽流感免疫抗体水平可达到8log2以上，规模养禽场禽流感免疫抗体水平达到6.5 log2以上，散养模式禽流感免疫抗体水平达到6 log2以上。
关键词：不同模式；禽流感；抗体监测
禽流感对养禽业的危害十分严重，疫苗免疫是预防和控制禽流感发生的最有效途径，而免疫后抗体水平的高低直接关系到实际的免疫效果。2005年－2006年，陕西省宝鸡市动物疫病预防控制中心对规模养禽场和散养禽群进行了禽流感程序化强制免疫，2年来共免疫注射23万羽(份、次)，免疫密度常年保持在95%以上，并根据免疫抗体消长情况及时调整免疫程序，适时免疫，确保养禽场禽流感免疫抗体合格率保持在80%以上，对预防和控制禽流感的发生起到了重要作用。
1 材料与方法
1.1 器材
96孔微量反应板，微量移液器，微量振荡器，离心机等。
1.2 试剂
阿氏液，pH 7.2 0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS液),1%红细胞悬液均为实验室自制。
禽流感标准抗原(批号为20050531,2005061104)，禽流感标准阳性血清(批号为053102,20060412)，均购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。
禽流感H5亚型灭活疫苗和禽流感-新城疫重组二联活疫苗，为哈尔滨维康生物制品有限公司生产，由陕西省畜牧兽医总站提供。禽流感双价(H5-H9)油苗购自青岛易邦生物制品有限公司。
1.3 方法
按照GB/T18936－2003高致病性禽流感诊断技术及标准进行血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验。
2 结果
2.1 不同日龄雏鸡H5、H9亚型母源抗体测定
收集免疫前后3日被测种鸡群所产种蛋入孵，孵出的苗鸡作为试验鸡，于1、4、8、10、12、14、16、18日龄随机抽样26只～30只，采血2mL分离血清，进行母源抗体检测，监测结果见表1。
从雏鸡的母源抗体检测结果可以看出，禽流感H5亚型的母源抗体合格率持续时间约为16 d，禽流感H9亚型的母源抗体持续时间约为14d。此时雏鸡的母源抗体的保护率为70%和64.3%，抗体滴度分别为5.38 log2和4.81log2。检测结果显示，种鸡的免疫抗体达到8 log2以上时，其子代的母源抗体也较高，1日龄时可达6.7log2,10日龄时母源抗体保持在6.38 log2,16日龄时为5.23 log2，但在5log2之上，说明此时的保护率仍然高于70%。同时说明禽流感H5母源抗体的持续期明显高于禽流感H9母源抗体持续期。
表1 雏鸡禽流感母源抗体监测结果
Table 1 Mat antibody against avian influenza surveillanceinchicken
日龄 Ages | 样品数 No. ofsamples | 亚型 Subtype | 抗体效价/log2 Antibodytiter | |||||
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | ||||
1 | 30 | H5 | 2 | |||||
H9 | 3 | 3 | ||||||
4 | 30 | H5 | 1 | 6 | ||||
H9 | 2 | 4 | 8 | |||||
8 | 30 | H5 | 1 | |||||
H9 | 3 | 6 | ||||||
10 | 26 | H5 | 1 | 3 | ||||
H9 | 5 | 5 | ||||||
12 | 26 | H5 | 5 | 6 | ||||
H9 | 6 | 5 | ||||||
14 | 26 | H5 | 2 | 4 | 7 | |||
H9 | 2 | 2 | 4 | 6 | ||||
16 | 26 | H5 | 1 | 3 | 3 | 5 | 6 | |
H9 | 2 | 3 | 3 | 4 | 5 | |||
20 | 26 | H5 | 3 | 4 | 2 | 6 | 7 | |
H9 | 4 | 3 | 5 | 4 | 7 |
2.2 种鸡场(H5、H9)免疫抗体检测结果
通过监测，逐步制定出种鸡场的免疫程序，用禽流感H5亚型疫苗免疫，首免时间为10 d～15d，第2次时间为上次免疫后第45天到第50天，用禽流感双价(H5-H9)油苗免疫，第3次免疫时间为上次免疫后第45天到第50天，用禽流感双价(H5-H9)油苗免疫，第4次免疫时间为上次免疫后第40天到第45天，用禽流感双价(H5-H9)油苗免疫，以后每隔3个月用禽流感双价(H5-H9)油苗免疫1次。为了科学评价此程序的免疫效果，选择25周、30周、35周、40周、45周、50周不同周龄经产种鸡，检测禽流感H5、H9亚型HI抗体滴度，监测结果见表2。
表2 种鸡禽流感H5、H9亚型抗体检测结果
Table 2 Antibody detectionresults on H5 and H9 subtype ofavianinfluenza in breeding chick
日龄 Ages | 样品数 No. ofsamples | 亚型 Subtype | 抗体滴度/log2 Antibody titer | ||||
5 | 6 | 7 | 8 | ||||
25 | 45 | H5 | 5 | 32 | 8 | ||
H9 | 2 | 6 | 26 | 11 | |||
30 | 45 | H5 | 5 | 32 | 9 | ||
H9 | 8 | 26 | 11 | ||||
35 | 45 | H5 | 2 | 9 | 25 | 11 | |
H9 | 2 | 7 | 25 | 11 | |||
40 | 45 | H5 | 1 | 6 | 31 | 10 | |
H9 | 7 | 31 | 8 | ||||
45 | 45 | H5 | 7 | 34 | 8 | ||
H9 | 6 | 32 | 8 | ||||
50 | 45 | H5 | 6 | 33 | 9 | ||
H9 | 2 | 8 | 25 | 11 |
选择3个种鸡场，5个规模禽场和3个散养群(以村为单位)，分别根据不同免疫程序，接种禽流感H5亚型灭活疫苗，禽流感H5-H9双价疫苗，禽流感-新城疫重组二联活疫苗，接种剂量、方法按说明书使用(种鸡场按试验2中的免疫程序实施；规模鸡场首免时间为14d～18 d，用禽流感-新城疫重组二联活疫苗免疫，第2次免疫时间为上次免疫后46 d～50d，用禽流感灭活疫苗免疫，第3次免疫时间为130 d～140d，用禽流感双价(H5-H9)油苗免疫，以后每隔4个月用禽流感灭活疫苗免疫1次。散养区域：首免时间为16 d～18d，用禽流感灭活疫苗免疫1次，第2次免疫时间为上次免疫后第55天到第60天，用禽流感灭活疫苗免疫1次。140 d～145d用禽流感灭活疫苗免疫1次，以后每隔6个月用禽流感灭活疫苗免疫1次。免疫后分别于第8、16、31、40、52周和56周采血2mL分离血清，进行禽流感HI抗体监测，监测结果见表3。
表3 不同模式鸡场禽流感亚型抗体监测结果
Table 3 Antibody detection results on subtype of avian influenza ondifferent breeding model
周龄 Ages | 种鸡场 Breed chicken farms | 规模鸡场 Medium scale chicken farms | 散养摸式 Free chicken farms | |||
采样数 No.of samples | 抗体滴度 Antibody titer | 采样数 No.ofsamples | 抗体滴度 Antibody titer | 采样数 No.ofsamples | ||
H5 | ||||||
8 | 30 | 7.88 | 7.45 | 45 | 7.48 | 40 |
16 | 30 | 8.12 | 7.51 | 45 | 7.69 | 40 |
31 | 28 | 8.23 | 8.01 | 50 | 7.73 | 40 |
40 | 26 | 8.31 | 8.04 | 48 | 7.36 | 40 |
52 | 30 | 8.04 | 7.89 | 47 | 7.39 | 40 |
56 | 30 | 8.15 | 7.92 | 50 | 7.30 | 40 |
在三种不同养殖模式下利用抗体监测来评价疫苗免疫效果是行之有效的方法。在不定期的免疫抗体检测中，种鸡场的免疫抗体长时间维持在8log2以上，规模鸡场和散养鸡免疫抗体长时间维持在6.5 log2和6log2以上，从禽流感发生和流行病学情况调查看，这些抗体滴度均可有效的预防禽流感的发生。
在2年多的免疫实践中发现，由于多年对新城疫的免疫，规模养鸡场和散养模式的鸡群，都存在高水平的新城疫母源抗体，这对禽流感H5亚型重组新城疫病毒载体双价灭活疫苗的免疫效果产生干扰。因而其首免时间确定在新城疫母源抗体HI滴度降至4lgo2以下时，首免后3周～4周达到高峰，平均水平介于5 log2～6 log2，HI抗体平均水平大于4log2时，可保持6周以上，此时进行2免效果较好。
在采用严格程序化免疫的情况下，不同养殖场的实际免疫效果有所不同，说明不同的饲养管理水平、养殖模式、免疫疫病种类、鸡场其他疫病实际流行情况等因素与实际免疫效果有很大的相关性。
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