中药方对奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌效果

奶牛乳房炎是奶牛常见的产科疾病，对奶牛业的发展危害较大，引起乳房炎的微生物有细菌、病毒、真菌、支原体等，以细菌感染比较多见。其中革兰氏阳性葡萄球菌和链球菌是引发乳房炎的主要致病菌，也有少数病原菌如大肠杆菌、化脓棒状杆菌、蜡样芽孢杆菌、绿脓杆菌等也可引起地方性流行。目前，国内临床上常用抗生素来治疗乳房炎，虽然见效快，但有药物残留、威胁人类健康、细菌产生耐药性等一系列的问题。

本试验筛选了3个中药方剂，对乳房炎的常见病原菌进行了体外药敏试验，报告如下。

1材料与方法

1.1奶样采集奶样来自于11头患有临床型乳房炎的奶牛，分4次采集，采样过程中遵守无菌操作规程，用冰盒送回实验室检菌，当天无法检验的，放4℃冰箱保存，48h内进行操作。?

1.2培养基及试剂鸡鲜血琼脂培养基，普通琼脂培养基，麦康凯琼脂培养基，营养肉汤及血清肉汤，各种糖发酵管，三糖铁琼脂高层斜面，3%过氧化氢，无菌兔血浆，6.5%氯化钠琼脂培养基，柠檬酸钠琼脂斜面，邓亨氏蛋白胨溶液，欧立希氏吲哚试剂，甲基红试剂，葡萄糖蛋白胨水，16%甲萘酚酒精溶液，醋酸铅琼脂，尿素酶高层斜面，半固体琼脂柱，革兰氏染色液，以上均按标准自行配置。?

1.3中药方剂Ⅰ：蒲公英、金银花为主药，配以连翘、丝瓜络、穿山甲、通草、芙蓉花，共7味中药组成；方剂Ⅱ：连翘、金银花为主药，配以蒲公英、紫花地丁，共4味中药组成；方剂Ⅲ：穿山甲、王不留行为主药，配以黄芪、当归、瓜蒌、连翘、蒲公英、金银花、紫花地丁、野菊花，共10味中药组成。?

1.4细菌分离与培养 用一次性注射器抽取0.5ml的待检乳汁倾注到培养平皿的一端，然后匀速晃动平皿并慢慢倾斜平皿使乳汁均匀地覆盖在整个平皿上，放入37℃温箱培养24h后取出，根据菌落的形态、大小、颜色等将菌落大致分类，然后配合显微镜检查观察细菌的形态、革兰氏染色特点仔细进行分类，将挑选出来的细菌作进一步的纯培养，培养方法同上。

注意链球菌需用鲜血琼脂进行培养。纯培养后镜检无杂菌者保存于试管斜面培养基内，按有关生化鉴定方法进行生化鉴定。?

1.5生化试验 主要的生化试验有溶血试验、各种糖发酵试验、过氧化氢试验、三糖铁试验、血浆凝固酶试验、CAMP试验、6.5%NaCl试验、柠檬酸盐试验、吲哚试验、M.R.试验、V-P试验、硫化氢试验、尿素酶试验、运动力检查15项。?

1.6中药针剂的制备3个方剂均按水提醇沉淀法进行制备，以方Ⅰ为例，总重50 g，加水900 ml，浸泡12 h，第1次煎45min，过滤，所剩药渣加600 ml煎30 min，过滤，合并两次煎液，用慢火浓缩成?50 ml?，相当于生药1 g/ml。煎剂50ml加入95%乙醇117 ml（乙

醇/混合液=70%），静置冷藏24 h后过滤，上清液蒸馏回收乙醇剩13 ml，再加入95%乙醇52ml（乙醇/混合液=80%），静置冷藏24 h后再过滤，上清液蒸馏回收乙醇，所剩溶液加入注射用水到50 ml达到生药1g/ml，调整pH在7.2～7.6之间，静置沉淀12 h，1 500 r/min离心5 min后过滤取上清液，灌注到2ml的安瓶中，封瓶后流通蒸汽100℃灭菌?30 min?，取出后放入4℃保存备用。?

1.7药敏试验方法 采用药物纸片琼脂扩散法。将浸有中药的纸片贴在平皿上，37℃培养18 h（链球菌培养24 h）后测定抑菌圈直径。?

2结果 ?

2.1在采集的11份乳样中共分离出275株病原菌，通过初步的细菌分离试验结合显微镜下检查发现，有葡萄球菌、链球菌和革兰氏阴性杆菌3类，其中葡萄球菌有79株，占28.73%，链球菌有167株，占60.73%，革兰氏阴性杆菌有29株，占10.54%。进一步生化鉴定共分离出9种病原菌，具体种类、数目见表1。

表1临床型乳房炎病原菌的种类及分布

金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 无乳链球菌 停乳链球菌 化脓链球菌 大肠杆菌 克雷伯氏杆菌 志贺氏杆菌 总数

菌数（株）23421410232331487275

百分比（%）8.3615.275.0937.0911.6412.005.092.912.55100

2.2药敏试验结果见表2由结果可知，3个中药方剂对主要致病菌均有不同程度的抑制作用，方剂Ⅰ对表皮葡萄球菌的抑制作用最强，且对无乳链球菌有抑制作用，方剂Ⅱ对腐生葡萄球菌的抑制作用最强，方剂Ⅲ对致病菌的抑制作用相差不多

表2中药药敏试验结果

金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌无乳链球菌停乳链球菌化脓链球菌大肠杆菌克雷伯氏杆菌

方剂Ⅰ9141111---10

方剂Ⅱ10820---129

方剂Ⅲ11912--8129

注：-：抑菌圈直径太小无测量意义或无抑菌圈

3讨论 ?

3.1临床型乳房炎中链球菌的检出率远远高于其他致病菌，无乳链球菌的检出率在临床型乳房炎病原菌中居首位，这与胡松华的报道基本一致，无乳链球菌是一种专一寄生在乳腺的病原菌，其传播与挤奶机器和挤奶人员有极大关系；在葡萄球菌中，表皮葡萄球菌的检出率高于金黄色葡萄球菌，与其他人的报道不同。在被检乳样中，大部分为链球菌和葡萄球菌混合感染，链球菌的感染具有普遍性，由此可反映出牛场临床型乳房炎病原菌的分布特点。?

3.2中兽医称乳房炎为乳痈，主要因为饲养管理不善、久卧湿热之地、湿热毒气上蒸侵害乳房；或因胃热壅盛，肝郁气滞，乳络失畅，以致乳房气血凝滞，淤结生痈；或因犊牛吸乳时咬伤乳头，邪毒入侵引起痈肿；或因奶牛拒绝挤奶，使乳汁停滞，乳房胀满等原因而导致本病。根据乳房炎的发病机理，拟定中草药方剂应以清热解毒、抗菌消炎、通经活血、消肿止痛、活络通乳为原则。?

中药方剂Ⅰ以清热解毒、消痈散结的蒲公英、金银花、连翘为主药，配以通草、丝瓜络、穿山甲通络活血、下乳消痈，芙蓉花消肿排脓。蒲公英苦以泻降，甘以解毒，寒能清热，兼以通乳，是治乳痈之要药，其主要抗菌成分为蒲公英甾醇、蒲公英素等，可引起菌体细胞膨大，细胞壁增厚等改变，从而达到抗菌作用。方剂Ⅰ由7味中药组成，诸药合用，以达清热解毒、活血消痈的作用，本方主要针对肝胃热盛、乳房红肿坚硬未化脓之乳痈。从试验结果上看，对3个类型的病原菌均有一定的抑制作用，是3个方剂中抑菌效果最好的方剂。?

中药方剂Ⅱ以消肿散结、清热解毒的连翘、金银花为主药，配以蒲公英、紫花地丁清热解毒、抗菌消炎。连翘苦泻寒清，清心火而解毒消痈，泻胆热而解郁散结，其主要抗菌成分为连翘酚和挥发性成分。金银花有较强的清热解毒作用，与连翘合用时抗菌范围互补，金银花的有效抗菌成分为绿原酸类化合物，具有较强的抗菌活性。连翘在体外对多种病原菌均有显著的抗菌、抗炎作用，并可抑制炎性渗出及水肿。方剂Ⅱ由4味中药组成，均属清热解毒类药物，诸药合用以达消痈散结、清解热毒的作用，本方主要针对心火郁结、乳房脓肿未成型之乳痈。方剂Ⅱ对腐生葡萄球菌的抑制作用最强。?

中药方剂Ⅲ以活血通经、下乳消痈的穿山甲、王不留行为主药，配以连翘、蒲公英、紫花地丁、金银花、野菊花清热解毒，通草清热利水通乳，当归疏气活血，瓜蒌解毒散痈。穿山甲活血通经、消肿排脓，其水提液和醇提液有明显的抗炎作用，抗菌能力较弱，王不留行善走血分，能行血脉，通乳汁，与穿山甲合用通乳排脓功效增强。方剂Ⅲ由10味中药组成，诸药合用以达下乳消痈、活血通经的作用，本方主要针对产后乳房胀痛，乳汁不下之乳痈。方剂Ⅲ主药的功能侧重于通乳下乳，活血排脓，因此，在体外抗菌实验中，效果不明显，应进一步调整方中药量，加强抗菌作用。从3个方剂的组成上看，以蒲公英和连翘为主药的方剂抑菌效果较好。蒲公英和连翘均为清热解毒类药物，具有较强的抗菌作用，乳房炎大多有细菌感染引起，因此在选择中药进行治疗时应以抗菌消炎作用强的中药为主药进行组方，以达到治疗的目的。?

3.3在中药方剂的体外抑菌试验中，采用药敏纸片琼脂扩散法，目前的报道较少，将中药制成注射剂，其有效抑菌成分被提炼出来，减少了淀粉等黏稠杂质的影响，有利于有效成分在琼脂中的扩散，从实验结果上看是可行的。付秀花等采用中药的水煎液用药物扩散法进行药敏试验也取得了较好的效果，冯世玉等用自行研制的乳疾宁等进行药敏试验也有一定的抑菌效果，但抑菌圈直径并未测量。国内对于用中药进行药敏纸片法测定抑

菌效果，还没有一定的规范的标准，目前还只能根据有无抑菌圈进行判定，抑菌圈越大说明效果就越好。?