缓释复方免疫增强剂对鸡减蛋综合征疫苗免疫增强效果的研究试验

鸡减蛋综合征（EDS-76）是影响养鸡业的一种常见传染病，对于该病的预防主要采用鸡减蛋综合征油佐剂苗接种。近年来由于多种病原混合感染，免疫抑制性疾病危害加大，造成疫苗免疫效果不佳，甚至发生免疫失败，因此对免疫增强剂的研究逐渐引起人们重视。徐可利等（1996）用黄芪、甘草、黄芩等中药研制的鸡减蛋综合征中药佐剂灭活苗安全性和免疫效力良好，较油乳剂灭活苗具有产生抗体早、抗体水平高、免疫效果好、易注射等优点。沈志强（1997）用蜂胶制成鸡减蛋综合征蜂胶灭活疫苗，经实验室试验和600多万羽份的田间区域推广试验表明，其免疫效果显著，优于进口和国产油苗。杨汉春等（1998）用玉米花粉多糖（PPC）口服或注射对新城疫-鸡减蛋综合征疫苗免疫效果研究表明，免疫后60天，中剂量PPC注射组新城疫和鸡减蛋综合征HI值显著高于口服组和空白组。笔者从具有免疫增强作用的中草药中提取出有效活性成分，与化学药物免疫增强剂结合，制备出缓释复方免疫增强剂，与鸡减蛋综合征疫苗配合使用，对鸡免疫增强效果进行了研究试验，现介绍如下。

一、材料与方法

（一）试验药品
缓释复方免疫增强剂：由中草药多糖和西药左旋咪唑、维生素E和亚硒酸钠组成，每粒重约0.25克，本课题组研制。
EDS-76灭活苗：黑龙江生物制品一厂生产。
淋巴细胞分离液：比重为1.081千克/升，TBD生物技术发展中心制造。
EDS-764单位抗原、ANAE孵育液,本课题组配制。
（二）试验方法
选择60只120日龄海兰褐蛋鸡，随机分成试验组和对照组，每组30只。分别肌肉注射鸡减蛋综合征灭活疫苗0.5毫升/只，同时给试验组雏鸡投服缓释复方免疫增强剂1粒/只，对照组不投服。按常规饲养管理，自由采食和饮水。在免疫前、免疫后10、20、30和40天，每组随机抓10只鸡，翅静脉采血，分离血清后用β-微量血凝抑制试验（HI）检测鸡减蛋综合征抗体效价，用T淋巴细胞E玫瑰花环试验（ERFC）测定T淋巴细胞ERFC形成率，用酸性α-醋酸奈酯酶染色试验（ANAE）测定T淋巴细胞ANAE阳性率，求每组的平均值，结果用 X ±S表示。试验数据采用MicrosoftExcel软件进行方差分析。

二、试验结果

（一）对鸡EDS-76抗体效价的影响
试验前试验组鸡减蛋综合征母源抗体效价与对照组基本接近，经检验组间差异不显著（P＞0.05）。免疫后鸡减蛋综合征抗体效价逐渐升高，10天后试验组比对照组提高1.8个抗体滴度，差异极显著（P＜0.01）。20天后试验组比对照组提高2.0个抗体滴度，差异极显著（P＜0.01）。此后试验组与对照组鸡减蛋综合征抗体效价逐渐降低，其中免疫后30天，试验组比对照组提高1.9个抗体滴度，差异极显著（P＜0.01）；免疫后40天，试验组比对照组提高1.4个抗体滴度，差异显著（p＜0.01），结果见表1。

（二）对鸡T淋巴细胞ERFC形成率的影响
试验前试验组鸡T淋巴细胞ERFC形成率与对照组差异不显著（P＞0.05）。免疫后鸡T淋巴细胞ERFC形成率逐渐升高，10天后试验组比对照组提高ERFC形成率6.5个百分点，差异极显著（P＜0.01）。20天后试验组比对照组提高ERFC形成率7.1个百分点，差异极显著（P＜0.01）。此后试验组和对照组鸡T淋巴细胞ERFC形成率逐渐降低，其中免疫后30天，试验组比对照组提高ERFC形成率3.3个百分点，差异显著（P＜0.05）；免疫后40天试验组比对照组提高ERFC形成率2.8个百分点，差异显著（P＜0.05），结果见表2。
（三）对鸡T淋巴细胞ANAE阳性率的影响
试验前试验组鸡T淋巴细胞ANAE阳性率与对照组差异不显著（P＞0.05）。免疫后鸡T淋巴细胞ANAE阳性率逐渐升高，10天后试验组比对照组提高ANAE阳性率4.7个百分点，差异极显著（P＜0.01）。20天后试验组比对照组提高ANAE阳性率5.4个百分点，差异极显著（P＜0.01）。此后试验组与对照组鸡T淋巴细胞ANAE阳性率
逐渐降低，其中免疫后30天试验组比对照组提高ANAE阳性率4.3个百分点，差异极显著（P＜0.01）；免疫后40天试验组比对照组提高ANAE阳性率1.9个百分点，差异显著（P＜0.05），结果见表3。

由此可见，鸡减蛋综合征疫苗抗体效价、T淋巴细胞ERFC形成率和ANAE阳性率具有基本相同的消涨变化趋势，三种测定结果具有一定的相关性。

三、讨论与结论

黄芪多糖（APS）具有促进免疫功能和抗体生成，提高巨噬细胞活性和血清IgG水平，抑制EAS，双向调节血糖等作用。孔祥峰等（2004）在雏鸡免疫新城疫Ⅳ系苗前后分别注射高、低剂量的黄芪多糖等9种中药成分，结果表明9种中药成分均能不同程度地提高抗体效价，且与给药时间、剂量和免疫次数有一定关系。
近年来研究发现左旋咪唑具有免疫增强作用，乔彦良等（2001）研究发现马立克氏病疫苗免疫同时应用左旋咪唑，能明显促进鸡细胞免疫和体液免疫功能，用药后外周血T淋巴细胞转化和血清内抗马立克病毒特异性抗体明显升高。
硒（Se）能明显影响动物非特异性免疫功能，对动物补充适当水平的硒能够促进淋巴细胞对不同促细胞分裂剂刺激的增殖反应，增强淋巴细胞吞噬和杀菌活性。邓桦等（2001）在雏鸡新城疫疫苗二次免疫前2天起连续3天，以0.75毫克/千克亚硒酸钠饮水，能明显地提高新城疫HI抗体滴度，增强体液免疫效果。
维生素E可以促进免疫系统的发育，增强机体的免疫机能和对传染病的抵抗力。硒和维生素E的适度配合具有协同作用。姚金水等（1994）试验发现，维生素E-硒注射液对蛋用雏鸡新城疫HI抗体γ-Ig和淋巴细胞ANAE阳性率均比对照组有明显提高，表明维生素E和硒对雏鸡的体液免疫和细胞免疫均产生良好的影响。本研究用缓释复方免疫增强剂配合鸡减蛋综合征疫苗免疫蛋鸡，显著或极显著提高了鸡减蛋综合征疫苗的抗体效价，表明缓释复方免疫增强剂能够增强鸡体液免疫功能，与上述结果一致。
T淋巴细胞是介导机体细胞免疫的重要细胞，E-玫瑰花环形成试验和酸性α-醋酸奈酯酶染色法能检测外周血液中T淋巴细胞百分数，敏感地反映机体的细胞免疫水平和动态变化，是目前鉴定和计算外周血液和各种淋巴组织中T淋巴细胞的常用方法之一。毕可东等（2000）研究表明，黄芪多糖、香菇多糖和复方多糖可使淋巴细胞百分率升高，ANAE+淋巴细胞百分率升高，复方多糖的效果优于单一多糖。淫羊藿所含的黄酮类和多糖类物质具有增强正常免疫动物T细胞功能，促进外周淋巴细胞增殖，增强对刺激原如ConA的反应能力，提高IL-2生成水平等作用。步志高等(1996)和胡元亮等（2000）对雏鸡注射淫羊藿-蜂胶合剂可显著提高雏鸡T淋巴细胞转化率和NK活力，提高细胞免疫功能和母鸡的体液免疫功能。王超英等（1998）给雏鸡饲料中添加20~30克/千克淫羊藿粉末，T淋巴细胞E花环形成率、B淋巴细胞花环形成率、外周血淋巴细胞转化率、ANAE阳性率与对照组差异显著或极显著，证明淫羊藿具有增强雏鸡免疫功能的多种效应。本研究制成的缓释复方免疫增强剂，发挥中西药免疫增强剂的各自优势，可以提高EDS-76疫苗免疫后鸡外周血T淋巴细胞E花环形成率和ANAE阳性率，表明该免疫增强剂能够增强鸡细胞免疫功能，与上述各试验结果一致。