中药复方对雏鸡接种ND疫苗免疫效果的影响

　　为了提高免疫效果，许多畜牧兽医工作者在积极研究免疫增强剂的作用，其中也包括中草药的免疫增强作用的研究，相关文献报道较多，尤其是补益药，无论是对机体特异性免疫，还是非特异性免疫均有一定的促进和调节作用。目前已确定的有几十种中药有增强畜禽机体免疫力、提高抗病力的作用，但新疆中药，特别是生长于塔里木盆地的中药，在免疫增强作用方面研究报道不多。本试验研究采用补益药当归、白芍、党参、黄芪结合生长于塔里木盆地的具有免疫增强作用的杈枝鸦葱、碱蓬、沙枣、镰叶碱蓬、沙棘、沙拐枣、盐穗木、大芸等，组成不同的中草药方，对雏鸡进行新城疫灭活疫苗免疫效果增强作用的研究，以筛选出有效的中药方用于生产中，为研究、开发、利用、保护塔里木盆地植物药提供科学的依据。

1 材料 ?

1.1 中药 杈枝鸦葱、碱蓬、沙枣、镰叶碱蓬、沙棘、沙拐枣、盐穗木、肉苁蓉、蒲公英、蜂巢等，于2003年7月~9月当地采集，由植物科技学院刘江华鉴定；当归、白芍、党参、黄芪、黄芩、板蓝根、连翘，购于当地中药店。?

1.2 实验动物 1日龄杂三黄雏鸡、小鼠、家兔等。?

1.3 仪器与试剂 显微镜、电子天平、25 μl移液枪、96孔“V”形血凝板、离心机、淋巴细胞分层液、酵母试剂、血凝素、NDⅠ疫苗、NDⅡ疫苗、ND标准血清、25%戊二醛、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等。?

1.4 Hank’s液配制 按文献［3］方法配制，备用。?

1.5 1%红细胞液制备 鸡翅采血，按文献［3］方法配制，备用。?

2 方法 ?

2.1 试验分组 选取健康的1日龄杂三黄雏鸡250只，饲喂3天后，随机分为5组，每组50只，公母均有。

2.2 饲养管理 分组前后均为平养，保温，自然光照，自由采食，上午饮药方煎液，饮完后给以清水自由饮用，晚上停水。?

2.3 中药方 组方一：当归、白芍、党参、黄芪、黄芩、板蓝根、连翘等；组方二：当归、白芍、党参、黄芪、黄芩、杈枝鸦葱、碱蓬、沙枣、蒲公英等；组方三：当归、白芍、党参、黄芪、黄芩、镰叶碱蓬、沙棘、沙拐枣、盐穗木等；组方四：当归、白芍、党参、黄芪、肉苁蓉、蜂巢等。?
每组方药粉碎后过筛混合，按8 g/kg体重，水煎，过滤取汁饮喂，每日1剂。从7日龄开始用药。用组方一的为第1组，依次用组方四的为第4组，不用药的为对照组。?

2.4 免疫程序 8日龄用NDⅡ疫苗常规量滴鼻、点眼；15日龄用法氏囊疫苗常规量注射；25日龄用NDⅠ疫苗常规量注射。?

2.5 HI滴度测定 对各组供试雏鸡，于14日龄（即用NDⅡ疫苗后第6天，添加中药后第7天）、21日龄（即用NDⅡ疫苗后第13天，添加中药后第14天）、28日龄（即注NDⅠ疫苗后第3天，添加中药后第21天）分别随机选取10只采血，用微量血凝抑制（HI）试验方法测定HI抗体滴度。?

2.6 红细胞C??3b?R花环试验 C??3b?R致敏酵母悬液制备、红细胞悬液制备、检测方法、制定结果参照文献［4］。 ?

对各组供试雏鸡，于16日龄（即用NDⅡ疫苗后第8天，添加中药后第9天）、24日龄（即用NDⅡ疫苗后第16天，添加中药后第17天）、31日龄（即注NDⅠ疫苗后第6天，添加中药后第24天），分别随机选取10只采血，计数红细胞C??3b?R花环率。?

2.7 EY?混合玫瑰花环试验 1%家兔红细胞悬液制备、C??3b?R致敏酵母悬液制备、淋巴细胞悬液制备、花环形成试验、判定结果参照文献。?

对各组供试雏鸡，于18日龄（即用NDⅡ疫苗后第10天，添加中药后第11天）、26日龄（即用NDⅡ疫苗后第15天，添加中药后第19天）、32日龄（即注NDⅠ疫苗后第7天，添加中药后第25天），分别随机选取10只采血，计数TC、BC花环率。?

2.8 免疫器官指数的测定 对各组供试雏鸡，于21日龄（即用NDⅡ疫苗后第13天，添加中药后第14天）、28日龄（即注NDⅠ疫苗后第3天，添加中药后第21天），每次、每组随机选取8只，分别称重（kg），捕杀，采集胸腺、脾、法氏囊3种免疫器官称湿重（g）。参照文献计算胸体比、脾体比、囊体比（即胸腺、脾、法氏囊与体重的比值）。?

2.9 体重变化的测定 对各组供试雏鸡，分别于4日龄、10日龄、17日龄、24日龄、31日龄，从各组随机选取20只，称重，求平均体重。?

3 结果与分析

3.1 HI滴度测定结果 从表1可见各组HI滴度均高于对照组，尤其是在用NDⅡ疫苗后第6天，与对照组相比，差异明显。其中第1组效果好，并能维持较长时间的高水平的HI滴度，第2组次之。

3.2 红细胞C??3b?R花环试验结果 从表2可见各组红细胞C??3b?R花环率均高于对照组，差异较显著，其中第1组差异极显著，其余3组差异不显著。各组红细胞C??3b?R花环率变化，随着雏鸡日龄的增长，红细胞C??3b?R逐渐降低，到24日龄时仍高于对照组16日龄时的水平。在注射NDⅠ疫苗后，各组均有增高的趋势。?

3.3 EY?混合玫瑰花环试验结果 从表3可见各组TC数量随着雏鸡日龄的增长逐渐增多，在18日龄时各组TC数量变化不明显，而在32日龄时各组TC数量变化较对照组明显，其中第1组增加TC作用最明显，其次是第2组。? 从表3可见各组BC数量随着雏鸡日龄的增长逐渐增多，在18日龄时第1组、第2组、第4组BC数量变化较对照组明显，而在32日龄时各组BC数量变化均较对照组明显，其中第1组、第2组增加BC作用最明显，其次是第4组。

3.4 免疫器官指数的测定结果 从表4可见实验鸡胸体比第2组、第1组较对照组高，说明该方中的中药对促进胸腺的发育有作用，随着鸡的日龄的增大、体重的增加，胸体比逐渐下降，但第1组、第4组、第2组促进胸腺的发育仍有明显的作用，其中第1组效果最好。?

从表4可见实验鸡第1组、第4组脾体比较对照组高，说明该方中的中药对促进脾的发育有作用。随着鸡的日龄的增大、体重的增加，脾体比明显增高，其中第1组促进脾的发育的作用最明显，其次是第4组、第2组。?从表4可见实验鸡第1组、第2组囊体比较对照明显增高，说明该方中的中药对促进法氏囊的发育有很好的作用。随着鸡的日龄的增大、体重的增加，用药组囊体比仍然在增高，其中第1组最明显，其次是第2组、第3组，而对照组囊体比随日龄的增大，有下降的趋势。说明各用药组对促进法氏囊的发育有较好的作用，并且可延缓法氏囊的衰退。第1组效果最好。

3.5 体重变化结果 从表5可见各试验组在增重上较对照组有较好的效果，其中第2组、第3组、第1组效果较好。在试验中，不断地有抓鸡、采血等应激因素的存在，影响了鸡的正常生长，因而从31日龄与4日龄体重差来看，虽然高于对照组，但不很明显。?

4讨论

4.1 从HI试验中可见，用药组抗体水平高于对照组，抗体水平衰减较缓，延长了有效免疫保护期。说明该中药方在提高机体免疫上有较好的作用。在生产中，注射疫苗后同时添加免疫增强类中草药，能很好地起到预防重大传染病的作用，但饲养成本势必增高。如何降低饲养成本，也能很好地预防重大传染病，可从调整免疫程序考虑。科学的免疫程序如何制定值得进一步研究。?

4.2 研究表明，红细胞具有清除免疫复合物、促进吞噬作用、识别抗原、提呈抗原及免疫节作用。?C??3b?R酵?母花环试验用于检测BC的C??3b?R，可作为红细胞免疫粘附功能的指标。红细胞C??3b?R花环率低，可判定原发性或继发性免疫功能低下?。

本试验中用药组红细胞C??3b?R花环率均高于对照组，说明该中药方在提高红细胞免疫功能方面有作用。

表5 体重变化

4.3 免疫增强类中草药如党参、黄芪等补气药，当归、白芍等补血药对细胞免疫有促进作用，能促进健康畜体淋巴细胞转化率，增加TC数量，提高巨噬细胞的吞噬能力，消除环磷酰胺降低机体免疫力的作用。清热药如黄芩、板蓝根、连翘等能提高巨噬细胞和白细胞的吞噬能力，促进淋巴细胞的转化，增加白细胞数和淋巴细胞数。机体免疫包括细胞免疫和体液免疫。细胞免疫主要是TC及其亚群参与，TC的数量、质量能反应细胞免疫功能的强弱。体液免疫主要是BC分化的浆细胞产生的各种抗体，还有补体的参与，因此，测定抗体的滴度和效价以及补体的含量，就可衡量体液免疫水平的高低。本试验中以补气药、补血药结合清热药组成的方一，从抗体滴度、?C??3b?R花?环率、EY?混合花环率、免疫器官指数等各个试验数据显示效果最好。生长于塔里木盆地的植物药如杈枝鸦葱、碱蓬、沙枣、蒲公英、镰叶碱蓬、沙棘、沙拐枣、肉苁蓉、盐穗木等单一使用时能增加抗体滴度，当与补气药、补血药结合时组成的方药与第一组相比，效果要差，但比对照组明显，在生产中是可以应用的。?

4.4 胸腺和鸟类的法氏囊为初级免疫器官，胸腺培育处女型TC，法氏囊培育处女型BC。脾脏是机体最大的淋巴器官，脾内的微环境有利于TC、BC及淋巴干细胞的生长发育和诱发免疫应答，有利于单核细胞在此生长分化，形成巨噬细胞和交错突细胞。在本试验中，用药组的方药不仅能促进免疫器官的发育，而且使血液中的TC、BC数量也在增多，对机体免疫是有利的，可达到免疫增强的作用。其作用机理可能是改变了免疫细胞的功能，TC、BC受佐剂的作用后，其数量明显增多，进入细胞增殖周期。促进BC分泌大量抗体，增强细胞免疫。促进TC转化生成更多的致敏淋巴细胞，增强细胞免疫。