5.12 转录调节子
Have发现转录调节子(Transcriptional regulator)对于肺炎链球菌在不同模型(如耳炎、肺炎和脑膜炎模型)中的完整毒力是必需的,这些可能的转录调节子可以调节组织特异性毒力因子的表达。rlrA是其中一个调节子,它对于肺炎链球菌在鼻咽部的定殖及肺部的感染是必不可少的。
5.13 表面锚定蛋白
肺炎链球菌的表面锚定蛋白(Surface anchored protein)在黏附过程中起到了强有力作用。肺炎链球菌表面锚定蛋白,属于LPXTG蛋白家族。突变试验表明,此蛋白对于肺炎链球菌在咽部的定殖和肺的感染是必需的。此序列可能与猪链球菌2型的黏附过程有关。
5.14 金属ABC转运子
细菌通常具有多种机制,从环境中获得必需的微营养(离子)。而金属ABC转运子(ATP-binding cassette transporter)正是肺炎链球菌从外界环境获得离子的必要工具。经同源性查找发现,9号片段与ABC转运子具有相似性,故其可能在猪链球菌2型的致病过程中发挥了作用。
6 猪链球菌的鉴定
6.1 生化鉴定
该菌在固体培养基上以双球菌为多,少量呈3个~5个排列的短链,在液体培养物中以长链为主。在鲜血培养基上菌落为圆形、微凸、表面光滑、湿润、边缘整齐、半透明,直径约1 mm~2 mm,能发酵葡萄糖和蔗糖,不发酵菊糖和马尿酸钠,对乳糖、蕈糖、甘露醇、山犁醇及水杨苷的发酵能力因毒株而异,不还原硝酸盐,接触酶阴性,低于10 ℃或高于45 ℃时不生长。
6.2 血清学鉴定
血清学方法包括协同凝集试验、荚膜反应试验、平板凝集试验、荚膜多糖的免疫印迹分析等。其中协同凝集试验应用最广,即将猪链球菌分型用抗血清与金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)A蛋白(SPA)相结合,再与待检的临床分离菌株作玻板凝集试验,阳性反应出现特异的颗粒状凝集物。荚膜反应的抗原为培养5 h~6 h的菌液(此时荚膜产生量最大),与抗血清混匀,直接在相差显微镜下观察,并设置空白对照进行比较,该法能分辨现有的35个血清型(1型~34型及1/2型)。平板凝集反应的方法是,将培养基制成链球菌的选择性培养基,再加50 mL/L的抗猪链球菌羊血清,制成平板,然后培养待检菌株,猪链球菌能形成大的沉淀圈,该法特异性大于94.5%,相对敏感率为88.7%。荚膜多糖的免疫印迹分析用来鉴定猪链球菌2型菌株,方法是先提取待检菌株的荚膜多糖,用PAGE分离,转移到PVDF膜上,用抗猪链球菌2型特异性抗体杂交,然后酶联显色,产生特征条带的为阳性。此法敏感、特异,但试验过程繁杂,故不适用于大规模的筛选鉴定。
6.3 多重PCR技术对猪链球菌血清型的鉴定
Smith根据型特异性的荚膜多糖基因设计引物,研制出一种快速敏感的三重分型PCR,分别能同时从猪的扁桃体中检测出猪链球菌1型(或14)、2型(或1/2)和9型。利用CPS2J、CPS1I、CPS9H3组基因,建立分型的多重PCR,它们的PCR产物大小分别为235、440、390 bp,它可以在同一个PCR体系中同时鉴定1型或14型、2型或1/2和9型。Marois C等为了检测试验感染猪及无症状临床猪的扁桃体携带细菌状况,建立了检测猪链球菌2型和1/2型的复合PCR检测技术,主要是针对细菌的16 S RNA序列和CPS2J序列进行检测。Silva L M等通过构建针对猪链球菌的GDH、CPS、EF、MRP、SLY、SsnA 6种基因的复合PCR,来鉴定和寻找毒力菌株的特征。PCR技术明显地弥补了生化鉴定的不足, 提高了鉴定的效率和准确性。适合于分子诊断和流行病学调查,同时为控制和根除猪链球菌病提供了有效的检测方法。
7 免疫预防与治疗
免疫预防是控制传染病的有效手段,研制能预防猪链球菌感染的疫苗是成功控制该病的关键。另外,多次加强免疫,受免疫猪的攻击保护率会相应提高。
除全菌外,猪链球菌2型胞壁外蛋白亦作为疫苗研究的重点。MRP、EF是猪链球菌2型重要的保护性抗原,可作为亚单位疫苗的候选蛋白。对感染猪链球菌2型并出现临床症状的猪,敏感的药物、合适的给药途径有助于感染猪的康复。最小抑菌浓度试验表明,大多数分离株对青霉素中度敏感,对阿莫西林、氨苄青霉素等则高度敏感,对四环素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、新霉素、链霉素则具有高度的抵抗力。Vela A I等检测了从西班牙病猪体内分离的151株猪链球菌对常用抗生素的耐药性,结果表明, 87%以上的猪链球菌对于四环素、磺胺类药物、大环内酯类药物和氯林可霉素耐药,而且87%以上的菌株对至少4种抗生素具有多重耐药性, 6%的菌株对6种以上的抗生素具有多重耐药性。最常见的多重耐药的药物为四环素、磺胺类、大环内酯类和林可胺类。猪链球菌9型对泰乐菌素和氯林可霉素的耐药性明显比猪链球菌2型的耐药性高。
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