反转录聚合酶链反应和核酸探针检测禽呼肠孤病毒的研究

禽呼肠孤病毒（ARV）主要引起鸡病毒性关节炎/腱鞘炎，种鸡产蛋率下降、受精率降低以及引进免疫抑制而继发其它疾病，致使鸡总体生产性能降低等，造成严重的经济损失。常规的病原分离和血清学方法由于特异性差、敏感性低、操作繁琐、费时等缺点，无法对该病进行快速鉴别诊断。
该研究从生产实际出发，根据现代分子生物学基本原理，全面阐明和解决PT-PCR扩增中的引物设计、扩增条件优化、样品模板提取和克隆片段连续、核酸探针制备、杂交条件优化等一系列技术关键问题，在国际上首次研究成功RT-PCR、套式PCR、一步法PT-PCR以及在国内首次建立核酸探针检测ARV的技术，并证明在对ARV的检测中，诊断成本也更低。通过对人工感染SPF鸡不同时间采集不同部位样品进行检测，在国内外首次揭示了ARV在感染鸡体内的动态分布规律。
该研究还成功地对两分离株S1基因进行了克隆测序，并与标准株作同源性比较，在国际上首次从分子水平上阐明了本地分离株与标准疫苗株间的遗传相关性。通过对该病流行病学的调查研究，摸清了鸡群在自然条件处ARV的感染率。通过对免疫种鸡后代雏鸡和SPF雏鸡的攻毒保护试验，结果表明免疫种鸡可以给后代提供良好的保护，首次探索出以生物安全为基础，基因检测为手段，免疫种鸡为重点的有效预防该病的综合防制模式，在生产中推广应用，使60多万羽种鸡ARV感染得到很好控制，其后代雏鸡死亡率明显降低，共减少直接经济损失2065.5万元，取得了显著的经济和社会效益。
该研究的技术路线带可应用到其它禽病诊断与综合防制措施的研究上，具有重要的学术意义。该成果应用的前景广阔，总体技术水平达到国际同类项目研究的先进水平。
  分享到：