测10株乳酸菌在发酵培养基过程中的活菌数变化,每隔8h取样测定,结果见图1。
由图1可知,10株乳酸菌在发酵培养基中均能生长,BL,LB,LR,LCR,LP在0~8h为延滞期;8~40h为对数期;40h后进入稳定期;LA,LC,LCP在0~8h为延滞期;8~32h为对数期;32h后进入稳定期;ST,SF在0~8h为延滞期;8~24h为对数期;24h以后进入稳定期。10株乳酸菌发酵48h时,BL和LB的活菌数达到109cfu/mL,其余8株乳酸菌的活菌数均在1.3×108~9.9×108cfu/mL。
2 10株乳酸菌发酵上清液对DDPH自由基的清除率
对DDPH自由基的清除可以评价乳酸菌样品清除这类稳定自由基的能力。由图2可知,这10株乳酸菌的发酵上清液对DDPH自由基都有一定的清除能力,其中LB的发酵上清液对DDPH自由基清除能力较强,清除率达到80.56%,其次是LA,LCp,LR发酵上清液,清除率在50%~70%之间,其余几株乳酸菌发酵上清液对DDPH自由基的清除率都在35%以下。
3 10株乳酸菌发酵上清液对O2-自由基的清除率
对O2-自由基的清除可以减少体内的氧自由基。由图3可知,这10株乳酸菌的发酵上清液对O2-自由基都有一定的清除能力,BL,LC,LA菌株的发酵上清液的清除率在30%以上,BL发酵上清液的清除率最高为36.78%,LP,LB,Sf,LCR4种菌株的发酵上清液对O2-自由基清除能力在20%~30%之间,其余几株乳酸菌发酵上清液对O2-自由基清除能力在20%以下,菌株发酵上清液对O2-自由基的清除能力可能与菌株的代谢产物对O2-作用机制有关。对DDPH自由基的清除率与对O2- 自由基的清除率之间并无对应关系,查阅文献得知可能与乳酸菌对这两种物质的作用原理不同有关。
4 10株乳酸菌产SOD酶活性变化
SOD酶是可以清除超氧阴离子自由基的酶,由图4可知,以不接菌为空白组,10株乳酸菌均产生SOD酶,其中LA产SOD酶量最多,活力可达到91.29U/mL,其次是LCP,LC,BL活力依次是90.56,82.88,76.63U/mL;接着是LB,SF,LCR,LR,LP,ST,产生的SOD酶量相差不大,活力在60~75UU/mL之间。
5 10株乳酸菌产GSH-PX酶活性变化
GSH-PX酶是清除过氧化氢和羟自由基的酶,由图6可知,以不接菌种的培养基为空白,测得其GSH-PX酶的活力为19.59酶活力单位,10株乳酸菌在发酵培养基48h时,测得添加LC的培养基产生较多的GSH-PX酶,其酶活力可达到65.45酶活力单位,其次是LCp.LA,LR,BL,酶活力依次是41.86,34.89,41.86,38.19酶活力单位,与空白相比,添加LC的培养基增加46酶活力单位。
6 结论与探讨
本研究选用来自传统发酵乳酸菌产品分离的10株乳酸菌,针对与抗氧化活性相关的对DDPH自由基的清除率和对O2-自由基的清除率以及SOD酶和GSH-PX酶的产生情况进行研究,加强发酵乳酸菌产品的抗氧化性。结果表明:10株乳酸菌在清除DDPH自由基和O2-自由基方面存在差异,但对DDPH自由基和O2-自由基都有一定的清除能力,其中LB对DDPH自由基清除能力较强,清除率达到80.56%;其次是LA,LCp,LR,对DDPH的清除率在45%~65%之间,BL菌株对O2-自由基清除能力较强,清除率达到36.78%;再次是LP,LB,SF,LCR 4种菌株,对O2-自由基清除能力在20%~30%之间;10株乳酸菌均具有产生这3种酶的能力,LCP和LA 产生较多的SOD酶,其中SOD酶活力达到91.29,90.56U/mL,LC产生较多的GSH-PX酶,活力可达到65.45酶活力单位,但10株乳酸菌产3种抗氧化酶方面无对应关系,是否存在其他抗氧化活性物质有待进一步研究。
参考文献
余芳,吕嘉枥等.几株乳酸菌的抗氧化活性研究.中国调味品,2017,42(4):32-41.
Talwalk A,Kailasapathy K,Hourigan J,et al.An improved method for the determination of NADH oxidase in the presence of NADH peroxidase in lactic acid bacteria.J Microbio Methods,2003,52(3):333-339.
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