中药化学成分预试

1. 试管预试法

（1）样品的制备

①酸性乙醇提取液  称取通过20目筛的中药粉末10g，加入70 ml 0.5%盐酸乙醇溶液，在水浴上回流10min，乘热过滤，滤液供检查酚性成分、有机酸和生物碱等。

②水提取液  称取通过20目筛的中药粉末10g，加入100ml水，在室温浸泡过夜，供检查氨基酸、多肽和蛋白质等。剩余药渣及浸液在60℃水浴上回流10min，乘热过滤，热滤液供检查糖、多糖、皂苷、苷类和鞣质等。

③甲醇提取液  称取通过20目筛的中药粉末10g，加入70ml甲醇，在水浴上回流10min，乘热过滤，滤液供检查黄酮及其苷类、蒽醌及其苷类、强心苷、香豆精及其苷类、内酯、酯类、挥发油，植物甾醇和油脂等。

④含植物色素、树脂较多的中药，为了避免颜色反应的干扰，可先加入100ml***，在水浴上回流10min。过滤，滤液用圆形纸层析预试法检查内脂、酯类成分、游离香豆精、游离黄酮、游离蒽醌和挥发油等。经***处理后的药渣再按甲醇提取法，其提取液供检查黄酮苷、强心苷、香豆精苷等。

（2）试剂的配制

①重氮化试剂  取对硝基苯胺0.35g溶于5ml浓盐酸，再缓缓倒入蒸馏水中稀释至50ml。另取亚硝酸钠5g溶于70ml蒸馏水中。用前将两液等量混合置于冰水中备用。

②碘化铋钾试剂（Dragendorff 试剂）  取次硝酸铋8g，溶于17ml 30%硝酸（比重1.18）中，搅拌，慢慢滴入含有碘化钾27.2g的20ml水溶液中。静置一夜，取上清液，加水稀释至100ml。

③碱性酒石酸铜试剂（Fehling试剂）  取硫酸铜结晶6.93g，溶于100ml水中。另取酒石酸钾结晶34.6g，氢氧化钾10g溶于100ml水中，使用时取两液等量混合。

④ 2%红细胞悬浮液  自哺乳动物静脉采血2ml，搅拌去除纤维蛋白，以2000 r/min离心分离红细胞，用生理盐水洗涤3次，再加100ml生理盐水均匀混合。

⑤氯化钠白明胶试剂  取白明胶1g溶于50ml水中（在60℃水浴中加热助溶），加入氯化钠10g，待完全溶解后，加水稀释至100ml。

⑥ 3,5-二硝基苯甲酸试剂（Kedde试剂）  取1ml 2%的3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液，3ml 4%氢氧化钠乙醇溶液，与7ml水混匀（使用时配制）。

⑦碱性苦味酸试剂（Baljet试剂）  取9ml 1%苦味酸乙醇溶液，1ml 10%氢氧化钠乙醇溶液（不含碳酸钠）混匀（使用时配制）。

（3）试验及结果判定

A. 酚性成分的检查

三氯化铁试验  取1ml酸性乙醇提取液，加入1%三氯化铁乙醇溶液1-2滴，呈现绿、蓝绿或暗紫色者，为阳性反应。

重氮化试验：取1ml酸性乙醇提取液，加入1ml 3%碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3min，再至冰水浴中冷却，滴加新配制的重氮化试剂1～2滴，呈现红色，为阳性反应。

B. 有机酸的检查

酸碱度试验：用pH试纸测定水提取液的酸碱性，颜色指示在pH7以下，表明含有有机酸成分。

显色试验：取1ml酸性乙醇提取液，用5%氢氧化铵溶液调节至中性。再按圆形滤纸层析法检查有机酸。

C. 生物碱的检查  取15ml酸性乙醇提取液，用5%氢氧化铵溶液调节至中性，在水浴上蒸干，其后加5%硫酸溶解残渣，过滤，其滤液供下述试验：

碘化铋钾试验：取滤液1ml，加碘化铋钾试剂1-2滴，呈现浅黄色或红棕色沉淀者，为阳性反应。

D. 氨基酸、多肽和蛋白质的检查

双缩脲试验：取被检冷水提取液1ml，滴加10%氢氧化钠溶液2滴，摇匀，滴入0.5%硫酸铜溶液，随加随振摇，呈现紫色、红色或紫红色者，为阳性反应。

茚三酮试验：取被检冷水提取液1ml，滴加0.2%茚三酮溶液2～3滴，摇匀，在沸水浴中加热5min，冷却后，呈现蓝或蓝紫色者，为阳性反应。

E 糖、多糖和苷类的检查

碱性酒石酸铜试验：取被检热水提取液1ml，滴加新配制的碱性酒石酸铜试剂4～5滴，在沸水中加热5min，呈现棕红色氧化亚铜沉淀者，为阳性反应。

α-萘酚试验：取被检热水提取液1ml，滴加5% α-萘酚乙醇溶液2～3滴，摇匀。沿试管壁缓缓滴入0.5ml浓硫酸，在交界处呈现紫红色环者，为阳性反应。

F. 皂苷的检查

泡沫试验：取被检热水提取液2ml，置于带塞试管中，用力振摇1min，如产生大量泡沫，放置10min，泡沫没有显著消失者，为阳性反应。

溶血试验：在玻片上滴一滴红细胞混悬液，置于显微镜下，滴加被检水提取液少许，如红细胞破裂、消失，为阳性反应。此试验也可在试管内进行。

G. 鞣质的检查

三氯化铁试验：取被检热水提取液1ml，滴加1%三氯化钠白明胶试剂1~2滴，呈现白色沉淀或混浊反应者，为阳性反应。

H. 黄酮类或其苷类的检查

盐酸—镁粉反应：取被检甲醇提取液1ml，加入浓盐酸4～5滴及少量镁粉。在沸水浴中加热3min，呈现红色者，为阳性反应。

荧光试验：取被检甲醇提取液1ml，在沸水浴上蒸干，加入硼酸的饱和丙酮溶液及10%枸橼酸丙酮溶液各1ml，继续蒸干。将残渣在紫外灯下照射，呈现强烈的荧光现象时，为阳性反应。

I. 蒽醌或其苷类的检查

碱性试验：取被检甲醇提取液1ml，加入10%氢氧化钠溶液1ml，如产生红色反应，加入30%过氧化氢1～2滴，加热后红色不褪，用酸调节至酸性，红色消失者，为阳性反应。

醋酸镁试验：取被检甲醇提取液1ml，加入1%醋酸镁甲醇溶液3滴，呈现红色者，为阳性反应。

J. 强心苷的检查

3,5-二硝基苯甲酸试验：取被检甲醇提取液1ml，滴加3,5-二硝基苯甲酸试剂3～4滴，呈现红色或紫色者，表明含有强心苷。

碱性苦味酸试验：取被检甲醇提取液1ml，加入碱性苦味酸试剂1滴，放置15min后呈现橙色或橙红色者，为阳性反应。

k. 内酯、香豆精或其苷类的检查

重氮化试验：取被检甲醇提取液1ml，加入3%碳酸钠溶液1ml，沸水浴中加热3min，再至冰水中冷却，加入新鲜的重氮化试剂1～2滴，呈现红色者，为阳性反应。

  L. 植物甾醇、三萜成分的检查

冰醋酸—浓硫酸试验：取被检甲醇提取液1ml，在水浴上蒸干。再用冰醋酸1ml溶解残渣，加入醋酸酐-浓硫酸（19：1）试剂1ml混匀，呈现黄色转变为红色→青色→污绿色变化反应者，为阳性反应。

氯仿-浓硫酸试验：按前法制备被检残渣用氯仿1ml溶解，加浓硫酸1ml，如在氯仿层呈现红或青色反应，在硫酸层有绿色荧光出现者，为阳性反应。

    M. 挥发油、脂肪的检查  取被检中药粉末2g，加20ml***，温浸30min后过滤，滤液供如下试验：

挥发油试验：取被检***滤液1ml，置于玻璃皿内自然挥发，如留有油状物残渣，加热后油状物消失或减少者，为阳性反应。

油脂的检查：取被检***滤液2ml，置于玻璃皿上自然挥发，将残渣加无水硫酸钠1～2粒，置于酒精灯上直接加热，如产生白色刺激性气体者，为阳性反应。

2. 圆形滤纸层析预试法

（1）样品的制备  取被检中药粉末5g，加95%乙醇50ml，在水浴上回流10min。过滤，滤液浓缩至25ml备用。

（2）试验步骤及方法  取直径12.5cm的普通圆形滤纸一张，滤纸中心处打一小孔，备插入滤纸芯之用。将0.1ml乙醇提取被检液滴加在距纸中心约1cm处（如图4—1）。一张圆滤纸可同时点上8～10个样品。样品滴好后，将一小条滤纸芯插入滤纸的中心小孔。移到盛有展开溶剂直径为12cm的培养皿中，滤纸芯浸在溶剂中，滤纸上再盖以同样直径的培养皿，以进行层析。溶剂的前沿达到滤纸边缘后，取出滤纸，待溶剂挥发后，根据情况，选择分别喷以不同的显色剂，以滤纸上出现的颜色斑点，确定样品的成分。

展开溶剂：甲醇或95%乙醇。

（3）显色和结果判定

①酚性成分的检查  显色剂以2%三氯化铁乙醇溶液与2%铁氰化钾水溶液等量混合使用。呈现蓝一紫色斑点者，为阳性反应。

②有机酸的检查  显色剂取0.1%甲基红乙醇溶

液5ml，0.1%甲基橙水溶液15ml，0.1%石蕊水溶液

20ml，混匀使用。呈现黄—红色斑点者，为阳性反应。

③植物甾醇、甾体皂苷、三萜类、三萜皂苷的检

查  显色剂以新配制的5%磷钼酸乙醇溶液，喷后置于

120℃烘5min至显色为止。呈现蓝—蓝紫色斑点者，

为阳性反应。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　图4-1圆形滤纸层析预试法

④内酯、酯类、香豆精及其苷类的检查  显色剂用异羟肟酸铁试剂。包括：

盐酸羟胺20g溶于50ml水，以乙醇稀释至200ml；

氢氧化钾50g溶于最小量水，以乙醇稀释至500ml；

三氯化铁10g溶于20ml 36%盐酸，再用200ml***振摇混匀。使用时先将前两种溶液按1:2比例混合，过滤，滤液喷滤纸，烘干后再喷后一种溶液，在80℃烘2min。呈现蓝—紫色斑点者，为阳性反应。

⑤黄酮及其苷类的检查  先在紫外灯下观察荧光，然后喷以1%三氯化铝试剂，再观察荧光是否加强。若在紫外灯下呈现黄色、黄绿色、蓝色荧光斑点，经试剂喷后，其荧光显著加强者，为阳性反应。

⑥蒽醌及其苷类的检查  显色剂以2%氢氧化铵溶液。呈现橙红或紫红色斑点者，为阳性反应。

⑦强心苷的检查  显色剂先喷 2% 3,5- 二硝基苯甲酸乙醇溶液，再喷4%氢氧化钠乙醇液。呈现紫红色斑点者，为阳性反应。

⑧生物碱的检查  显色剂用碘化铋钾试剂（取次硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸，加40ml水混匀；另取碘化钾8g溶于20ml水中。使用时取两溶液各5ml，加冰醋酸20ml混均喷用）。呈现棕色、棕红色斑点者，为阳性反应。

⑨氨基酸的检查  显色剂用0.2%茚三酮水溶液，喷匀后，80℃烘干10min。呈现红色蓝色、蓝紫色斑点者，为阳性反应。

（四）分析讨论