颠覆传统：蓝耳疫苗可以无免疫抑制！且TJM-F92株蓝耳疫苗可用于紧急接种

　　武华：博士，研究员，博士研究生导师，中国农业科学院一级岗位杰出人才。

　　1995年赴美国堪萨斯州立大学博士后（Research Associate）研究，主要从事抗菌多肽及其抗菌多肽基因调控的研究；2000年，美国先灵葆雅动物保健品公司（现在改名为默沙东）任首席科学家，曾经出任辉瑞动物保健品公司首席科学家。

　　2004年回国任乾元浩生物股份有限公司总经理， 2006年受聘中国农科院一级岗位杰出人才。先后主持课题多项。

　　"蓝耳病是世界难题，美国加拿大都为此而头疼；净化的各种尝试基本以失败为终。"当记者在一线采访养户时，不少人对蓝耳病的净化都抱着怀疑态度。的确，蓝耳病之所难以净化，首先没有区分野毒感染与疫苗毒株的疫苗，其次，蓝耳病毒变异性高，使防控难度进一步加大，最后，蓝耳疫苗的免疫机制尚未非常清晰，给临床疫苗的使用带来一定困惑。

　　然而这一切，在中国农业科学院武华博士看来，都不是问题。据武华博士介绍，TJM-F92 株相对于其他高致病蓝耳病毒，除NSP2上缺失30个氨基酸外，在另一个位置上缺失了120 个氨基酸，因此能够区分疫苗毒株与野毒。"根据我们的研究，缺失了这120 个氨基酸后的蓝耳病毒，没有免疫抑制，可以用于紧急接种。"武华告诉记者，TJM-F92 株疫苗没有免疫抑制，这跟大部分国内研究者的研究结果有很大不同。

　　颠覆传统：蓝耳疫苗可以无免疫抑制

　　记者：目前不少养殖场都抵触使用高致病性蓝耳弱毒疫苗。

　　武华：是的。因为蓝耳病毒有免疫抑制性，因此为蓝耳疫苗的免疫带来不少困扰。但现在我们广大养殖户好像陷入了固定思维：认为蓝耳疫苗就是有免疫抑制性，因此拒绝使用。加上不少专业学者在各种不同的场合都在灌输这个思想，因此养殖户更加深信不疑。殊不知，蓝耳疫苗因为疫苗毒株不同，特性亦有所不同。而我一直研发的TJM-F92 株疫苗的确不存在免疫抑制，所有的实验以及结果都有，各界人士可随时试用检验。

　　记者：哦？不存在免疫抑制？为何？

　　武华：这个跟病毒的特性有关。在高致病性蓝耳病疫苗的三个毒株中，有天津株（TJM-F92 ）、江西株（JXA1-R）、湖南株（HuN4-F112 ），其抗原性应该相差不大。共同特征：三个毒株在Nsp2的N 端有30个氨基酸缺失，这是高致病性毒株的特征，与毒力及免疫原性无关。而TJM-F92 株在NSP2的另一个位置还有一个更大缺失，连续缺失120 个氨基酸，国内外研究这一段基因的缺失与病毒毒力和免疫调节相关。体外表现为不存在免疫抑制。

　　虽然目前我们也尚未搞清楚哪一段基因控制蓝耳病毒的哪个表征，但对TJM-F92株的120个氨基酸缺失基因，国际上也有同类的研究报道：国外有研究者应用反向遗传技术构建蓝耳病毒P129毒株的Nsp2基因缺失131 个氨基酸，基因缺失后，病毒毒力消失；而TJM-F92 株Nsp2基因缺失120 个氨基酸与P129株的131个氨基酸缺失基因段，大部分重叠。

　　记者：那这120 个连续缺失的氨基酸，遗传性状稳定吗？会不会仅是细胞培养中个别代次的表现呢？

　　武华：我们将该病毒用Mac145细胞培养到120 代，通过基因分析，这120个氨基酸的缺失一直比较稳定，并不会出现突然插入或再缺失。这也是我们幸运的原因，当时分离到这株特殊的病毒也是一种偶然。

　　同时，为了保证质量，我们将细胞做克隆纯化，每5-10代进行一次噬斑克隆纯化，保证克隆细胞中只繁殖生长TJM-F92 毒株。从源头上做好品质控制。克隆纯化，说起来简单的4 个字，其实背后是庞大的工作量，要从庞大的细胞数量中筛选出一株仅繁殖TJM-F92 毒株的细胞株，这是我们团队10多个博士与硕士研究生夜以继日的劳动成果。

　　但这是值得的，毕竟我们生产出来的产品质量就不会是波浪式的时好时坏曲线。这也是国内产品与国外产品的根本区别所在：质量的稳定性。我们在质量稳定性方面也做了很多的工作，从细胞生长的源头就开始严格控制，现在我们甚至能够知道每个克隆细胞里面能够长多少的目标抗原。数据化的程控，真正让质量稳定成了可能。

　　TJM-F92株蓝耳疫苗可以用于紧急接种

　　记者：有些养殖场会定期监测抗体水平，以评估免疫效果。

　　武华：检测的蓝耳抗体阳性率不一定代表对蓝耳病的保护力，因为大多数ELISA试剂盒检测的蓝耳病抗体是N蛋白（核蛋白），而N蛋白对抗原性的增加没有根本作用，也就是说N蛋白不能诱导产生病毒中和抗体，无法反映免疫状态，所以也不能代表对蓝耳病的保护力。再加上蓝耳病毒的ADE 现象，抗体阳性率和抗体水平的高低与攻毒保护不一定呈现正相关关系。其实只要有区分疫苗毒株与野毒的疫苗，这监测的意义就大不同。

　　记者：如何不同呢？

　　武华：其实，目前蓝耳病无法净化主要有几个方面的原因。首先无法切断本场内PRRS流行，无法净化；其次使用的疫苗可能散毒，净化也无意义；然后，不能阻止外源病毒传入，病毒无法净化；最后，不能快速筛查带毒猪，无法净化。

　　疾病净化需要具备以下几个要素

　　1 、有效疫苗并与野毒存在可遗传鉴别标记；

　　2 、疫苗对各年龄猪安全；

　　3 、疫苗株应具有低排毒，复制和传播性能差；

　　4 、配套鉴别诊断试剂盒；TJM-F92 株蓝耳苗具有上述特点，并已研制出配套诊断试剂盒。如果使用双基因缺失的TJM-F92 株疫苗，能够使用试剂盒筛选出带毒猪，逐步减少易感动物。同时TJM-F92 株疫苗能够快速产生抗体，保护猪群。这一切让净化成为了可能。

　　记者：快速产生抗体？那是否意味着该疫苗可以用来紧急免疫接种？

　　武华：因为TJM-F92 株的蓝耳疫苗没有了免疫抑制性，抗体依赖增强性也随着消失。所以在发病猪群检测出蓝耳病病毒后，对未发病猪群建议接种蓝耳病活疫苗。实际上，紧急接种就是疫苗产生的保护在和野毒感染之间的"赛跑"，紧急接种的效果就要看疫苗接种产生的保护是否较野毒感染致病快。

　　活疫苗接种后2周可以产生比较好的免疫，而灭活疫苗产生中和抗体的时间较晚，一般4-6周才能产生，这也是为什么活疫苗效果优于灭活疫苗的另一个原因。同时，我们还要强调的是，紧急接种的对象是受到威胁但是尚未被感染的猪只，而且最好预留一定的免疫空白期。

　　疫苗双基因缺失的特点为蓝耳病净化提供工具

　　记者：蓝耳疫苗的双基因缺失就能区别疫苗毒株与野毒？有相关的检测试剂盒吗？

　　武华：因为基因片段不同，疫苗毒株比野毒少了120个氨基酸（360 个核苷酸），所以我们可以通过PCR 的方法，能甄别出毒株。目前我们实验室已经开发出诊断试剂盒，能大规模应用到生产一线。

　　记者：具体在生产一线，净化蓝耳病如何实施呢？

　　武华：首先净化原则是使用疫苗。在同一猪场同时用TJM-F92 株疫苗免疫，包括断奶猪，怀孕猪，种公猪等；用鉴别诊断ELISA 试剂盒常规检验，持续半年；同时更换阳性猪，控制引进猪群，保证阴性猪引入；如此坚持2-3 年时间，猪群可转变为阴性群。

　　记者：目前不少养殖场抵触使用蓝耳苗，有另外个原因就是免疫失败，或是担心免疫干扰了其他疫苗的发挥。

　　武华：蓝耳疫苗的免疫机理到目前为止学术界亦没有完全研究明白。而对于免疫失败，根据我个人分析，可能有几种原因。首先，可能是疫苗毒与野毒的抗原性间存在差异。天津市疫控中心等多家研究机构对我国近几年来蓝耳病流行毒株的基因相似性进行对比，结果发现，我国的流行毒株不但与进口疫苗2332株有明显差异，与我国早先的经典疫苗毒株的亲缘性也较远。

　　这足以说明，我国目前的流行毒株是高致病性蓝耳病的弱化毒株，其抗原性可能更接近于高致病性蓝耳病，而不是经典蓝耳病毒株。这一点需要特别注意。

　　中国科学院动物研究所的研?a href="http://www.kangdf.cn/topic/zhukesou?rf=">咳嗽币舶盐夜?抖?〉幕?蛳嗨菩杂刖?涿乐拗昙芭分拗杲?斜冉希?峁?夜?抖?《静坏?诨?蛳嗨菩苑矫嬗胁煌??淇乖?砸灿忻飨圆钜臁?/p>

　　记者：猪场选择疫苗需考虑蓝耳毒株吗？

　　武华：需要作出适当的选择。尽管现在的流行毒株的毒力不如2006年的强，但它是高致病性蓝耳病毒的子代而非经典蓝耳病毒。Nsp2和ORF5基因的核苷酸序列发生变异而区别于经典蓝耳病病毒。

　　目前，许多猪场并未根据自身的疫病流行特点制定免疫方案，加上此前的疫苗存在散毒可能性，总有部分猪处于易感状态，疫苗毒或野毒的循环感染造成猪场蓝耳病难以净化，形成长期的防疫隐患。因而，如何更好地理解蓝耳病的流行、感染、免疫特点成为制定免疫方案的关键。

　　实际上，鉴于生产成本的压力，部分养猪场难以做到全封闭饲养，隔绝外部疫病传入就比较困难。实践发现，如果能有效地落实基础免疫、消毒隔离等措施，中小型猪场同样能远离蓝耳病。