青霉素类兽药的作用机理是干扰细菌细胞壁的合成，而细胞壁的合成发生于细菌的繁殖期，所以青霉素类兽药对繁殖期的细菌具有杀灭作用，又称此类兽药为繁殖期杀菌药。青霉素类兽药在临床上使用非常广泛，但如果使用不当，不仅起不到治疗作用，而且会延误病情，甚至造成不必要的经济损失。使用青霉素类兽药应注意以下几点：
1.严格掌握用药范围。青霉素G对大多数革兰氏阳性菌引起的疾病，如呼吸系统感染、猪丹毒、炭疽、败血症等有很好的疗效，对各种螺旋体和放线菌都有强大的抗菌作用；苯唑青霉素、双氯青霉素、苄星青霉素则对耐青霉素G的金黄色葡萄球菌所致的呼吸道感染、乳腺炎、创伤感染及败血症等有可靠的疗效。
2.选择适宜的给药途径。绝大部分青霉素类兽药对酸不稳定，内服易被胃酸和消化酶所破坏，故内服效果差或无效。青霉素类兽药最适宜的给药途径是进行肌肉注射，肌注后吸收快而完全，疗效确切。
3.注意过敏反应。青霉素类兽药用于动物机体一般无不良反应，但对个别家畜偶见有过敏反应，严重者可产生过敏性休克。易过敏家畜中以马、骡、猪、犬等多见，注射后不久出现流汗、兴奋不安、肌肉震颤、心跳加快、呼吸困难、站立不稳、抽搐等症状。因此，在用药过程中应注意观察，如出现过敏反应，应立即停止用药，同时，用肾上腺素或地塞米松进行抢救。
4.青霉素钾盐不宜静脉注射，宜进行肌肉注射。在使用青霉素钾盐时还应注意动物的血钾变化，一般禁止大量使用，特别对高血钾患畜禁用。
5.青霉素类兽药不宜空腹注射。以免患畜因血糖较低而引起昏厥。
6.不应随意加大剂量。大剂量或超大剂量使用青霉素类兽药，可干扰凝血机制而造成出血或引起中枢神经系统中毒，引起动物抽搐，大小便失禁，甚至瘫痪等症状。也可使耐药菌迅速诱导产生分解青霉素的β-内酰胺酶。所以在兽医临床上应严格掌握正确的使用方法和剂量。
7.青霉素类兽药应即溶即用。由于青霉素类药物的水溶液不稳定，在室温下溶解的时间越长，其效价就越低，分解产物也就越多，致敏物质也就不断增加。所以应做到即溶即用，以确保药效，减少毒副作用。
8.注意配伍禁忌。磺胺类钠盐与青霉素混合，会使青霉素失效；青霉素与庆大霉素合用，会使庆大霉素失效；青霉素不能与四环素、氯霉素、碳酸氢钠、维生素C、阿托品、氯丙嗪等混合使用，否则失效。
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